陕西山豆根提取物体外对人食管癌Eca-109细胞抗增殖及诱导凋亡的实验研究

摘要

目的：恶性肿瘤严重威胁着人类的健康和生命，人们努力尝试各种治疗方法。临床应用证明，中草药具有较好的抗肿瘤作用，不仅对化、放疗起减毒、增敏、增效的效应，而且能够预防肿瘤复发转移，在恶性肿瘤治疗中显示出其独特的优势。关于中草药的有效成分及作用机理的研究越来越受关注，如长春新碱(VCR)、紫杉醇(PTX)已经被广泛应用于临床，并取得了良好的临床效果。但是，目前应用于临床的中草药有效成分药仍较少，因此，从中草药中研发新的抗肿瘤药成为恶性肿瘤治疗的重要课题之一。 山豆根作为一种传统的中草药，具有清火、解毒、消肿、止痛之功效。有关其抗肿瘤作用有较多的报道，如用山豆根治疗肝癌、食道癌、肺癌、白血病等由来已久。现代药理研究证明山豆根具有广泛的药理活性。先后证明山豆根水提物灌服或注射对多种实验性肿瘤有抑制作用，其水提物和醇提物均能抑制多种肿瘤生长，能抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖。因此，陕西山豆根抗肿瘤活性及作用机制的研究有广泛的应用价值。 方法： 1、MTT法测定山豆根提取物对Eca-109细胞的生长抑制率。 ①实验组：加入不同浓度的山豆根提取物； ②阳性对照组：加入长春新碱； ③空白对照组：加入等体积的生理盐水。 每个浓度设四个平行孔，作用于Eca-109细胞后，测定细胞生长抑制率，计算出IC<,50>值。同时用MTT法绘制山豆根提取物作用于Eca～109细胞的生长曲线，设空白对照组。以上实验各重复3次，求平均值。 2、通过光学显微镜、倒置显微镜、HE染色法对细胞形念进行系列观察，利用流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳法观察Eca-109细胞的周期变化及细胞凋亡。 结果： 1、山豆根提取物对Eca-109细胞的增殖抑制作用 1.1 山豆根提取物列Eca-109细胞生长有明显的抑制作用。且抑制率有明显的剂量依赖性，P均<0.05。 1.2 山豆根提取物处理Eca-109细胞的IC<,50>为17.27±2.21ug/ml。实验组与空白对照组OD值的差异均有统计学意义，与阳性对照组相比无明显差异。 1.3 从生长曲线来看，两种浓度的山豆根提取物(30ug/ml，20ug/ml)处理Eca-109细胞7d，每天三组两两相比有统计学意义。 1.4 山豆根提取物对细胞周期的影响。山豆根处理Eca-109细胞48h后与空白对照组比较，细胞周期发生明显变化，且呈剂量依赖关系，并看到凋亡峰。 2 山豆根提取物诱导Eca-109细胞凋亡的作用山豆根提取物20ug/ml作用于Eca-109细胞48h后，倒置显微镜观察、HE染色可见典型的凋亡细胞的形态学特征及流式细胞仪观察到细胞的凋亡峰。琼脂糖凝胶电泳显示明显的DNA梯形凋亡条带，而空白对照组无DNA梯形凋亡条带出现。 结论： 1、山豆根提取物Eca-109细胞有显著的抗增殖作用，其抗增殖作用呈明显的剂量依赖关系。 2、山豆根提取物抗Eca-109细胞增殖可能是通过诱导细胞凋亡而进行。

目录

文摘

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引言

研究背景

1目前食道癌的研究现状

1.1流行病学

1.2对食道癌病因病机的认识

1.3食道癌治疗

1.4山豆根临床应用效果

2山豆根研究概述

2.1药理研究

2.2作用

2.3药物产地简介

3细胞凋亡与肿瘤

3.1凋亡概念

3.2细胞凋亡的特征

3.3意义

3.4细胞凋亡与肿瘤关系

实验研究

1材料

1.1细胞

1.2药品及主要试剂

1.3主要器材及仪器

2实验流程及方法

2.1中药提取

2.2主要溶液配制

2.3细胞培养

2.4 MTT比色法测定药物抗癌活性

2.5生长曲线的绘制

2.6流式细胞仪观察细胞周期变化

2.7山豆根提取物诱导Eca-109细胞凋亡的形态学检测

2.8 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡

2.9统计学处理

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢