基于胸腺素a1活性片段的环肽类似物的设计、合成与活性评价

摘要

环肽是第三种策略的典型代表,其限制性构象能稳定多肽的二级结构,一方面能增加与受体的亲和力和选择性,提高生物活性;另一方面还有可能提高环肽的抗酶解能力<'[3]>,在多肽药物的设计中经常被使用到.为了寻找活性高并能改善其体内的代谢稳定性的Tα1类似物,在已有文献报道的构效关系研究的基础上,我们设计了一系列的含半胱氨酸的环肽类似物,引入半胱氨酸的目的在于合成策略的考虑.考虑环肽形成限制构象过于刚性可能影响到生物活性构象的形成,我们在设计的环肽又分别引入了脂肪氧醚链改善环肽的构象刚性,以期对环肽保持原有活性构象有积极意义.在这些化合物中,在此基础上,通过环合过程中引入的巯基作为修饰位点我们对环肽进行PE修饰,如果能进一步提高肽类化合物在体内抗降解能力.将为以后发展抗酶解和化学降解的肽类药物奠定基础.在该课题中,我们应用硫酯法合成了线性肽硫酯25个,从中选择了15个线性肽硫酯进行环合得到了15个新结构的环肽,这些环肽中的5个含有脂肪族链状结构,分别应用两个不同分子量mPEG-MAL对其中的1个环肽进行了修饰研究.所有目标化合物经过RP-HPLC纯化,纯度大于90％,经质谱分析确定结构正确.从淋巴细胞增殖实验的结果来看(1)在高浓度的条件下(100μg/L),30个化合物具有促淋巴细胞增殖的效果,增殖活性均好于阳性对照物Tα<,1>(17—24)和Tα<,1>.(2)在中等浓度的条件下(10μg/L),19个化合物具有促淋巴细胞增殖的效果,其活性均好于阳性对照物Tα<,1>(17—24),16个化合物促淋巴细胞增值的效果强于Tα<,1>.(3)在低浓度下(1μg/L),35个化合物包括阳性对照化合物和Tα<,1>均未观察到显著的促淋巴细胞增殖的效果.从环合前后活性变化的情况来看:环合后得到的环肽产物和未环合前肽硫酯相比较:(1)在中等水平的浓度条件下,15个环肽中有13个显示了淋巴细胞增殖的效果,其中有3个在环合后活性降低,其余10个没有显示出显著性的差异.(2)在高浓度的条件下,15个环肽中有14个显示了淋巴细胞增殖的效果,6个化合物的活性比环合前的活性提高,5个化合物比环合前的线性肽硫酯活性降低.为了进一步研究合成的Tα<,1>活性片段环肽类似物的其它免疫增强效果,我们还将进行环肽类似物的诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ的实验,这部分工作委托中科院上海药物所免疫药理室,实验正在进行当中,尚未得到可分析数据.

目录

论文中主要缩写词的说明

第一章：研究背景及立题依据

一.前言

设计思想

环肽合成方法概述

参考文献

第二章：胸腺素α1环肽类似物的设计合成及纯化鉴定

2.1 胸腺素α1环肽类似物的设计

2.2合成路线的选择

2.3 实验部分

参考文献

附图

第三章：环肽化合物的高分子修饰

一.前言

二.聚乙三醇修饰方法的选择

三.实验部分

实验数据及附图

参考文献

第四章：胸腺素α1及其类似物的生物活性评价

一.生物活性评价方法的选择

二.体外活性评价

三.结果与讨论

参考文献

结语

致谢

综述 生物活性环肽研究进展

一引言

二天然存在的环肽的发现和全合成研究

三环肽的化学合成

五结语

作者简介

参考文献