TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白表达与活性检测

摘要

为了实现TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白（TPOMP<,14>-Fc）的活性表达,我们将TPO模拟肽与截短人IgG1Fc的融合基因克隆到pET2X上,构建重组质粒,借助载体上硫氧还蛋白功能,实现该融合蛋白在BL21中的部分可溶表达.以pPICZαA为载体,我们构建了含TPO模拟肽与人IgG1Fc融合基因的重组质粒,实现融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达（占分泌上清60﹪）.优化两种表达系统的培养条件,实验结果证实BL21表达的TPO模拟肽与截短人IgG1Fc融合蛋白（TPOMP<,14>-TFc）的可溶比例略有增加、但主要仍然以包涵体形式存在.Gs115分泌表达的TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白（TPOMP<,14>-Fc）水平有所提高.用羊抗人IgG1Fc抗体进行的western-blot试验证实融合蛋白含有IgG1Fc,细菌裂解上清和酵母浓缩上清刺激TPO依赖细胞株Ba／F3-mpl的增殖作用表明融合蛋白具有TPO模拟肽活性.

目录

前 言

第一部分TPO模拟肽与截短人IgGFc融合蛋白在细菌中可溶性表达

材料和方法

结 果

讨 论

第二部分TPO模拟肽与人IgGFc融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

材料与方法

结 果

讨 论

第三部分融合表达的TPO模拟肽体外活性检测

材料方法

结 果

讨 论

总 结

致谢

参考文献

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