肝癌细胞特异性结合单链抗体的筛选、克隆表达及活性研究

摘要

该研究旨在筛选出与人肝癌细胞特异性结合的抗体,以期有助于肝癌的早期诊断与治疗.首先用人肝癌细胞SMMC7721免疫BALB/c小鼠,从免疫鼠脾细胞中提取总RNA.通过RT-PCR构建出组合单链抗体cDNA文库,通过噬菌体表面呈现,用人肝癌细胞及人肝细胞对噬菌体-单链抗体（phage-scFv)进行亲和富集及phage-ELISA筛选鉴定,获得一株与人肝癌细胞系HepG2结合特异性较高的单链抗体scFv5-56,其与HepG2细胞最低结合滴度比与人正常肝细胞HL02细胞的最低结合滴度低100多倍.经序列分析.scFv5-56基因全长732bp,编码244个氨基酸残基.通过与计算机数据库及互联网提供的已知各种抗体CDR序列比较.发现此单链抗体为基因序列与以往任何抗体序列皆不同的新的单链抗体.为了进一步检测scFv5-56与肝癌细胞的结合活性,将scFv5-56基因插入表达载体pASK84-Apm中,scFv5-56与突变型碱性磷酸酶（Apm)在大肠杆菌TG1周质中得到可溶性表达.通过细胞ELISA,scFv5-56-Apm融合蛋白能够便捷地检测出肝癌细胞.该研究获得的与人肝癌细胞系HepG2结合特异性较高的单链抗体为研究肝癌的早期诊断方法奠定了初步基础.并且为揭示肝癌细胞生长增殖这一复杂过程提供了线索.

目录

前言

第一章应用噬菌体抗体库技术筛选与肝癌细胞特异性结合的单链抗体

第一节单链抗体cDNA文库的构建

材料与方法

结果

第二节肝癌细胞特异性结合的单链抗体的筛选

材料与方法

结果

讨论

参考文献

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三章单链抗体scFv5-56在大肠杆菌中可溶性表达及细胞活性初步研究

第一节单链抗体scFv5-56在大肠杆菌中可溶性表达

材料与方法

结果

第二节单链抗体scFv5-56细胞活性研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

研究总结

综述

致谢