NF-κB调控氧化LDL激活系膜细胞TGF-β1转录的研究

摘要

该文拟从Ox-LDL为刺激物,大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,观察NF-κB、TGF-β1的变化,并对两者之间可能存在的关系做进一步的检测,探讨脂质肾损伤的发生机制.第一章,Ox-LDL对系膜细胞NF-κB活性的影响.目的:Ox-LDL刺激大鼠肾小球系膜细胞引起的NF-κB活性变化,以及NF-κB各单体的蛋白表达水平改变,并确定活化的NF-κB中的二聚体成分.结论:Ox-LDL随时间延长持续激活肾小球系膜细胞的NF-κB的活性,也以浓度依赖的方式诱导NF-κB的活性;Ox-LDL激活的可能是p65、p50组成的异二聚体,与其他单体的关系可能不大.第二章,Ox-LDL激活系膜细胞NF-κB信号传导通路的研究.目的:IκB结合NF-κB,使其局限在细胞浆,抑制其活性,NF-κB的活化需要IκB的降解,检测Ox-LDL刺激后的系膜细胞IκB的蛋白表达水平和NF-κB活性的变化进行观察,研究Ox-LDL激活系膜细胞NF-κB可能的信号传导通路.结论:Ox-LDL诱导的系膜细胞NF-κB的激NF-κB活可能是通过PKC信号通路引起的IκB降解而实现的,但不能排除NF-κB单体蛋白合成增多和转录因子串话的可能.也不能完全排除PKA通路的参与可能,而ERK和p38MAPK通路介入的可能性不大.第三章,NF-κB对Ox-LDL诱导TGF-β1转录调控的研究.第一节,Ox-LDL对TGF-β1转录的影响及TGF-β1启动子分析.目的:通过对TGF-β1启动子进行系列缺失分析,载入报告基因质粒pGL3-Basic,并以之转染系膜细胞,了解TGF-β1启动子对Ox-LDL应答的转录增强和减弱区域.结论:Ox-LDL以时间和剂量依赖的方式诱导TGF-β1的转录,在TGF-β1启动子的—1551bp至—845bp与—845bp至—629bp之间可能存在对Ox-LDL刺激应答的转录增强序列.第二节,NF-κB诱捕寡核苷酸对Ox-LDL诱导TGF-β1转录的影响.目的:观察NF-κB诱捕寡核苷酸转染系膜细胞后Ox-LDL诱导的TGF-β1转录变化,了解NF-κB在Ox-LDL诱导的TGF-β1转录中的作用.结论:NF-κB的decoy-ODN明显抑制Ox-LDL引起的TGF-β1转录增强,decoy-ODN能有效与TGF-β1启动子序列竞争,进一步证明NF-κB参与了Ox-LDL诱导的TGF-β1的转录增强.

目录

前言

第一章Ox-LDL对系膜细胞NF-κ B活性的影响

1.材料和方法

1.1材料

1.2主要试剂

1.3试剂配制

1.4方法

1.5统计分析

2.结果

2.1 SD大鼠肾小球系膜细胞的鉴定结果

2.2 Ox-LDL诱发的NF-κ B活性变化

2.2 NF-κ B二聚体成分的变化

3.讨论

图

第二章Ox-LDL激活系膜细胞NF-κ B信号传导通路的研究

1.材料和方法

1.1材料

1.2方法

2.结果

2.1 OX-LDL对系膜细胞IκB蛋白表达的影响

2.2PSI对OX-LDL诱导MSC中IκB降解的影响

2.3 PMA对IκB表达的影响

2.4FORSKOLIN对IκB表达的影响

2.5多种蛋白激酶抑制剂对NF-κB结合DNA能力的影响

3.讨论

图

第三章NF-κB对Ox-LDL诱导TGF-B1转录调控的研究

第一节Ox-LDL对TGF-B1转录的影响及TGF-B1启动子分析

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

图

第二节NF-κB诱捕寡脱氧核苷酸对Ox-LDL诱导TGF-B1表达的影响

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

图

参考文献

全文结论

创新点

致谢

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