异源双链DNA体外错配修复功能检测模型的构建及弥漫性大B细胞性淋巴瘤中错配修复系统的分析

摘要

目的:噬菌体M13mp2特殊的生活史决定了每一种噬菌体有双链和单链两种DNA形式,以其为材料构建含有单碱基错配的异源双链DNA分子,用于检测由hMSH2-hMSH6(hMutSα)识别错配启动的修复过程;以及含有双碱基缺失的异源双链DNA分子,用于检测主要由hMSH2-hMSH3(hMutSβ)识别插入一缺失环(insertion-deletion loop, IDL)启动的修复过程.以这两种分子作为待修复模板;以TK6细胞株作为错配修复功能完整表型,以Lovo细胞株作为错配修复功能缺陷表型,构建体外错配修复(mismatch repair ,MMR)功能检测模型.并使用诊断明确的遗传性非腺瘤病性结直肠癌(herediary nonpolyposis colorectal cancer, HNPCC)及散发性大肠癌(sporadic colorectal cancer, SRC)评价该模型的检测准确性和敏感性.模型稳定后,将其应用于弥漫性大B细胞性淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL),与其他的检测手段一起共同探讨MMR系统与DLBCL发病机制的相互关系.结论:以含有单碱基错配和双碱基缺失的异源双链DNA分子为待修复模板,以细胞株TK6为错配修复功能完整表型,以细胞株Lovo为错配修复功能缺陷表型,在国内首次建立体外错配修复功能检测模型.应用该模型检测诊断明确的HNPCC和SRC病人肿瘤组织的MMR功能状态,其结果与各自不同的发病机制及微卫星状态一致,说明该模型具有的检测准确性和敏感性.同时也说明,国际HNPCC合作小组推荐的5个微卫星位点具有较高的检测敏感性,是临床工作中首选的检测手段;而对于家族史不明确,或微卫星稳定,而诊断存在困难的病例直接应用该模型进行MMR系统分析,可以提供一些有意义的线索.通过多种检测手段对DLBCL的检测发现,由hMSH2-hMSH6(hMutSα)复合物识别单碱基错配启动的错配修复功能的缺失可能在DLBCL发病中不起主要作用.而由hMSH2-hMSH3(hMutSβ)复合物识别由≥2bp组成的插入/缺失环(insertion/deletion loop, IDL)启动的错配修复及防止类同源染色体重组的错配修复功能的缺陷可能会参与DLBCL的发生发展.对MMR系统与DLBCL发病机制相互关系进行深入的研究非常必要,不论对深入认识MMR系统本身,如:错配修复的类型,及错配修复与人体细胞染色体重组的关系;还是对DLBCL发病机制的研究并探讨其进一步分类的可能性都有重要的意义.

目录

引言

参考文献

第一部分：含有单碱基错配及双碱基缺失的异源双链DNA分子的构建

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分：体外错配修复功能检测模型的建立

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分：弥漫性大B细胞性淋巴瘤中错配修复系统的分析

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

总结

攻读博士学位期间发表及待发表的论文题录

文献综述 错配修复系统与肿瘤发病机制相互关系的研究进展

参考文献

攻读博士学位期间取得的成绩

致谢

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