抗前列腺癌新药LXT-101缓释微球注射剂的研究

摘要

随着蛋白质组学和基因组学计划的逐步深入，越来越多的多肽、蛋白质等生物技术类药物在诊断、治疗或预防等各个方面发挥着十分重要的作用。与小分子药物相比，多肽及蛋白质等大分子药物稳定性差、易被酶降解、生物半衰期短；所以如何将此类药物有效地递送到人体相应部位一直是药剂学研究的重大课题。目前生物技术类药物在临床上应用的剂型大多为注射用溶液或冻干粉针剂。此类制剂需频繁给药，患者的顺应性较差，治疗费用较高。如果将此类药物制成生物可降解缓释微球注射剂，能有效防止药物在体内很快消除，显著延长给药间隔，持续维持最低有效浓度，避免了普通制剂很难克服的峰谷现象，因而可以减少总的给药剂量，减轻某些毒副作用，达到缓释长效的目的。此外，缓释微球注射剂不需植入，释药后不必取出，为患者提供了一个很好的给药方式。因此，缓释微球注射剂成为近几十年来药剂学研究的热点之一。 聚乳酸(PLA)和聚乳酸一羟基乙酸共聚物(PLGA)由于其良好的生物可降解性和组织相容性，作为药用辅料已获得FDA的批准。主药LXT-10l属于促黄体生成激素释放激素(LHRH)拮抗剂类似物，属新一代前列腺癌治疗药物，与LHRH激动剂相比具有更大的应用前景。 本论文以不同分子量和不同乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例的PLGA作为载体，研究制备了LXT-101缓释微球注射剂，研究内容主要包括含量测定和体外释放度测定的方法学建立、LXT-10l微球的处方和制备工艺研究、体外释药方法的研究、微球的体外释药机理研究、药效学以及初步安全性评价、生物相容性以及体内过程的研究。 1.LXT-101缓释微球注射剂的处方前研究本章建立了LXTol01缓释微球注射剂中药物含量测定以及释放度的测定方法。结果表明HPLC法用于含量测定，方法灵敏、精密、专属性强；荧光分光光度法用于微球释放度的测定，方法简便，灵敏度较高，精密度良好，大大节约了试剂和时间，缩短了处方工艺的评价周期。 2.LXT-101缓释微球注射剂的处方设计和工艺研究分别采用乳化一溶剂萃取法、乳化一溶剂挥发法以及无水法(包括部分无水法和完全无水法)制备了LXT-101微球。以微球形态、粒径及其分布、微球载药量以及包封率、体外释药曲线等作为微球的质量评价指标，通过单因素考察和正交实验对处方和工艺的参数进行优化。这些参数包括微球固化时间、外水相盐浓度、有机溶剂组成、PLGA分子量、LA／GA不同比例以及搅拌速度等。结果表明所制得的微球表面光滑圆整，偶见少许孔洞，粒径在20～50ltm之间，包封率在60～80％，体外可持续释药30d。 3.LXT-IOI缓释微球注射剂体外释药方法的建立与评价本章主要对LXT-101微球的体外释药条件进行了考察，主要包括不同的释放介质、表面活性剂不同浓度、释放介质不同体积、不同释放容器等。同时建立了加速释药方法以缩短评价周期，对长期试验和短期试验的释放度数据进行点点对应的相关性拟合，结果表明二者相关性较好，可用体外短期加速释放实验预测长期释药的释放度数据。 通过对LXT-101微球的外观形态、药物含量、体外释放行为的考察，表明60Co辐射灭菌对于本课题制备的注射用LXT-101微球有效、可行。冻干保护剂甘露醇的加入对微球中药物含量以及释放曲线的影响较小，并能在一定程度上避免微球的粘连和聚集。 4.LXT-101缓释微球注射剂释药机理的研究通过测定不同时间点微球在释放介质中的粒径变化评价微球的溶胀程度，通过失重法间接了解PLGA微球的降解速度，采用Higuchi、零级、一级方程和Ritger-Peppas指数模型对释药曲线进行拟合。结果表明PLGAl4000和PLGA36000微球的释药曲线符合Higuchi方程，说明在微球释药过程中，扩散机制起到了较为重要的作用。 5.LXT-101缓释微球注射剂药效学研究及初步安全性评价本章以大鼠体内睾酮水平作为评价指标，对LXT—101缓释微球注射剂的药效学进行了评价。结果表明微球粒径、制备方法、处方对大鼠体内睾酮水平的抑制均有显著的影响。LXT-101微球的量效关系实验表明其药效呈剂量依赖型，随着给药剂量的增大，起始作用以及可持续抑制睾酮水平至去势的时间也随之升高，起效更快且作用时间延长。大鼠性器官重量下降说明LXT-101缓释微球注射剂可通过持续抑制体内血清睾酮水平，最大限度的降低睾丸的反应，有效地抑制垂体一性腺轴的功能而发挥药效。由大鼠睾丸、精囊腺以及前列腺给药前后形态学和病理切片的观察得出以下结论：尽管主要性器官有不同程度的炎症反应，但整体形态没有明显变化，也没有发生明显的功能性变化。 6.LXT-101缓释微球注射剂的生物相容性研究以小鼠和大鼠作为模型动物，对LXT-101微球的生物相容性进行了研究。结果表明微球注射给药后仅引起轻微的炎症反应，没有组织渗透液蓄积，并且没有观察到明显血管与纤维的增生，说明微球制剂的体内生物相容性较好。 7.LXT-101缓释微球注射剂体内过程的初步研究与评价以大鼠作为模型动物，对LXT-101长效注射缓释微球的体内过程进行了初步研究。通过大鼠体内药代动力学的研究表明LXT-101微球在给药后的1d内具有突释效应，药代动力学过程符合二室模型。通过测定不同时间点在注射部位微球中的残留药物计算微球的体内。释药速度，在此基础上，与体外释药速度进行点点对应的相关性评价，结果表明体外释药百分数与体内释药百分数之间有一定的相关性。

目录

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摘要

前言

第一章LXT-101缓释微球注射剂的处方前研究

第二章LXT-101缓释微球注射剂的处方设计和工艺研究

第三章LXT-101缓释微球注射剂体外释药方法的建立与评价

第四章LXT-101缓释微球注射剂释药机理的研究

第五章LXT-101缓释微球注射剂药效学研究及初步安全性评价

第六章LXT-101缓释微球注射剂的生物相容性研究

第七章LXT-101缓释微球注射剂体内过程的初步研究与评价

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