p16INK4a基因甲基化及p16INK4a、p14ARF、Survivin、PTEN与喉鳞状细胞癌发生发展的相关性研究

摘要

第一部分喉鳞状细胞癌中p16INK4a基因甲基化状况及其表达
　　 目的:研究喉鳞状细胞癌p16INK4a基因启动子区域5'CpG岛的甲基化状况,探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。
　　 方法:采用甲基化特异性PCR检测30例喉鳞状细胞癌及15例远离肿瘤的正常喉粘膜新鲜组织中p16INK4a基因启动子区域5'CpG岛的甲基化状况,并应用免疫组化EnVision法检测p16INK4a蛋白的表达情况。
　　 结果:30例喉鳞状细胞癌中23例(76.7％)显示p16INK4a基因启动子区CpG岛甲基化;p16INK4a蛋白缺失率为93.3％(28/30)。15例正常喉粘膜中未检测到p16INK4a基因异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性。p16INK4a基因甲基化状况与其蛋白表达和临床分期密切相关。
　　 结论:p16INK4a基因5'CpG岛异常甲基化在喉鳞状细胞癌中频率很高,可能在喉癌发生发展中扮演了重要角色;而且这可能是一个早期事件,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入探讨。
　　 第二部分p16INK4a、p14ARF脚蛋白在喉鳞癌中的表达及临床意义
　　 目的:探讨p16INK4a、p14ARF蛋白在喉鳞状细胞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)组织中的表达、临床意义及其相关关系。
　　 方法:采用免疫组织化学EnVision法检测71例LSCC组织中p16INK4a、p14ARF蛋白的表达。
　　 结果:71例LSCC标本中,35例p16INK4a蛋白阴性(49.3％),29例p14ARF蛋白阴性(40.8％),15例p16INK4a、p14ARF蛋白表达均阴性(21.1％)。p16INK4a、p14ARF蛋白阴性相互间无显著相关性(P＞0.05)。p16INK4a、p14ARF蛋白阴性率均与患者性别、年龄及临床分期无显著性差异(P＞0.05)。p14ARF蛋白在Ⅰ～Ⅱ期病例中强阳性(+++)占阳性比例为41.7％,在Ⅲ～Ⅳ期中强阳性(+++)比例为11.1％。
　　 结论:p16INK4a和p14ARF在LSCC发生过程中起重要作用。两种蛋白的失活是各自独立的事件。p14ARF蛋白的缺失发生在LSCC的早期。
　　 第三部分喉鳞状细胞癌中Survivin、PTEN基因的表达及临床意义
　　 目的:探讨凋亡抑制基因Survivin和抑癌基因PTEN在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义。
　　 方法:应用免疫组化EnVision法检测71例喉鳞癌标本中Survivin、PTEN蛋白的表达,并以10例声带息肉组织为对照。
　　 结果:Survivin蛋白在声带息肉中阴性;在71例喉鳞癌中,53例(74.6％)阳性;Survivin阳性率与喉癌患者的年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P＞0.05),与肿瘤发生部位、临床分期、病理分级、淋巴结转移、预后有关(P＜0.05)。PTEN蛋白在声带息肉中强表达(100％);在71例喉鳞癌中,33例(46.5％)阳性;PTEN阳性率与喉癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、发生部位无相关性(P＞0.05),与临床分期、病理分级、淋巴结转移、预后有关(P＜0.05)。在喉癌组织中Survivin与PTEN的表达呈负相关(P＜0.05)。
　　 结论:Survivin、PTEN基因的异常表达与喉癌的发生发展及预后有关,Survivin、PTEN基因可作为评价喉癌生物学行为的重要参考指标。Survivin、PTEN基因二者在喉癌的发生、发展中协同作用。