非酒精性脂肪肝细胞模型中INK4位点反义非编码RNA和p14ARF及p16INK4a的表达

摘要

目的 研究INK4位点反义非编码RNA (ANRIL)、p14ARF和p16INK4a的表达与非酒精性脂肪肝细胞增殖的关系.方法 油酸以不同浓度(25、50、100 μmol/L)和时间(12、24、48 h)作用HepG2细胞,采用油红O染色观察细胞内脂滴形成,同时运用ELISA检测细胞内三酰甘油含量,构建非酒精性脂肪肝细胞模型;采用MTT法检测细胞增殖情况.接着实时定量RT-PCR和Western blot检测长非编码RNA ANRIL以及其反义转录本p14ARF和p16INK4a的mRNA水平,Western blot检测p14ARF和p16INK4a蛋白表达水平.结果 在50 μmol/L油酸作用于HepG2细胞24 h时,细胞增殖活力最为旺盛,且脂质含量增加明显.在这个细胞模型中ANRIL、p14ARF和p16INK4a的表达均低于正常对照组.结论 不饱和游离脂肪酸作用下,ANRIL和p14ARF、p16INK4a表达呈同向性改变;在非酒精性脂肪肝细胞模型中,肿瘤抑制基因p14ARF和p16INK4a表达下降,促使HepG2异常增殖,可能与非酒精性脂肪肝不经肝硬化阶段即癌变一定程度上存在相关性.