柴胡总多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的调节及其对大鼠急性肺损伤的影响

摘要

系统性红斑狼疮(SLE)和急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是临床上常见的两种疾病。SLE是一种累及多系统的自身免疫病,临床表现复杂、病程迁延反复,病人常伴有多种异常自身抗体和补体激活,多数患者最终出现肾功能不全,严重影响着患者的生命。ALI/ARDS是在严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病过程中,肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,导致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。
　　这两种疾病在一定程度上有共同之处。首先,二者都包括于免疫性疾病的范围内,在病变过程中伴有免疫功能的失调;第二,非特异性免疫应答发挥了重要的作用。第三,二者的病程进展中都出现有相关炎症因子的大量释放。
　　柴胡是我国的传统中药和常用中药,包括伞形科多年生草本植物柴胡(北柴胡)BupleurumchinensisDC.和狭叶柴胡(南柴胡)BupleurumscorzonerifoliumWilld,具有抗炎及免疫调节的作用。小叶黑柴胡分布于我国西北地区,在过去的研究中,我们从小叶黑柴胡根部提取出了柴胡多糖,并证实(1)小叶黑柴胡总多糖(BPs)对空肠弯曲菌CJ-S13l诱导的系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠有较好的防治作用:抑制了SLE小鼠体液免疫功能亢进,抑制了脾肿大并缓解了肾损伤;(2)在ALI大鼠模型中,初步观察到小叶黑柴胡总多糖10mg.kg-1能缓解ALI病理损伤,并能抑制补体过度活化和减少肺部组织中补体活化产物的沉积。
　　鉴于以上我们已有的药效学研究成果,结合单核巨噬系统在两种疾病中所起的重要作用,我们观察柴胡总多糖对以巨噬细胞为代表的小鼠单核巨噬系统的作用,以进一步了解柴胡总多糖对SLE的作用可能的靶点;在大鼠急性肺损伤模型上,观察柴胡总多糖对其的保护作用的具体机制。
　　1柴胡总多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能调节的作用目的研究小叶黑柴胡总多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法小鼠随机分组,小叶黑柴胡总多糖(BPs20、40、80.mg.kg-1·d-1)、醋酸泼尼松(Prednisone3mg·kg-1·d-1)或左旋眯唑(Levamisole25mg.kg-1·d-1)灌胃给药(day0-day6),观察小叶黑柴胡总多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。检测内容包括检测药物对巯乙醇酸钠诱导的小鼠活化巨噬细胞吞噬自身凋亡细胞、抗体介导的绵羊红细胞(SRBC)和鸡红细胞(CRBC)功能的影响;Griess法检测药物对巯乙醇酸钠诱导的活化巨噬细胞和细菌脂多糖(LPS)诱导的炎性巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平的影响;ELISA法检测药物对活化和炎性巨噬细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。
　　结果柴胡80mg.kg-1·d-1提高了活化巨噬细胞对自身凋亡细胞的吞噬百分率和吞噬指数(P＜O.001,p＜0.01)。柴胡20、40和80mg.kg-1·d-1显著提高了活化巨噬细胞对抗体介导的绵羊红细胞的吞噬百分率和吞噬指数(P＜0.001);显著促进了活化巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率(p＜0.05)和吞噬指数(P＜0.01)。柴胡20、40、80mg·kg-1·d-1显著抑制了活化巨噬细胞分泌NO和IL-6的水平(P＜0.001),但对活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的水平无影响;与活化巨噬细胞相比,LPS刺激的炎性巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P＜0.01)。柴胡40、80mg.kg-1.d-1,显著降低了炎性巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β的水平(P＜0.001)。柴胡20、40、80mg.kg-1.d-1降低了炎性巨噬细胞分泌IL-6的水平(P＜0.001)。
　　结论柴胡总多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的功能有调节作用:促进了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力(吞噬自身抗原、吞噬IgG调理的绵羊红细胞,吞噬鸡红细胞):对活化巨噬细胞释放细胞因子的影响较轻,但对炎性巨噬细胞释放的过量的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6有显著抑制作用。2柴胡总多糖对大鼠急性肺损伤的作用
　　目的研究小叶黑柴胡总多糖对大鼠急性肺损伤的保护作用及作用机制。方法大鼠随机分为伪手术组(sham)、造模组(model)、柴胡组(BPs2.5,5,10,20mg-kg-1,ig)及阳性药对照组(地塞米松磷酸钠,Dexamethasone2mg.kg-1,ip)。通过缺血再灌注和内毒素气道滴注建立大鼠ALI模型。肺组织作病理切片,HE染色观察大鼠病变及给药后改善状况;测定大鼠肺湿干重比;考马斯亮蓝法测定肺泡支气管灌洗液(BALF)中蛋白含量;计数BALF内中性粒细胞含量;测定BALF中MPO含量;ELISA法测定BALF中细胞因子IL-6,和TNF-α含量;通过溶血实验测定血清总补体水平。
　　结果缺血再灌注联合LPS滴注可成功诱导出大鼠急性肺损伤模型。与伪手术组相比,模型组大鼠出现明显的肺部损伤,病理切片可见大量出血、肺泡壁增厚和肺泡变形塌陷;肺湿干重比,BALF液中性粒细胞数,MPO,蛋白含量,TNF-α,IL-6和血清总补体活性等都有显著的增高(P＜0.001)。口服给药后,柴胡明显改善了病理损伤,病理切片显示给药后炎症程度明显减轻,肺泡腔出血明显减少,肺泡壁变薄,炎性细胞浸润减少。柴胡10和20mg.kg-1显著降低了湿干重的比例(P＜0.05)。柴胡各剂量组BALF中蛋白和TNF-α水平显著下降(P＜0.01):柴胡5、10和20mg.kg-1减少了BALF中性粒细胞数、抑制MPO和IL-6水平的升高(P＜0.001);柴胡20mg·kg-1降低了大鼠血清中补体经典途径的激活水平。(p＜0.05)。
　　结论通过缺血再灌注联合LPS气管滴注可成功地诱导出急性肺损伤模型。给药小叶黑柴胡总多糖能够明显改善肺病理损伤,降低肺泡上皮和内皮细胞的高通透性,改善肺泡腔及肺间质水肿并减少了中性粒细胞的聚集浸润,其作用机制可以与抑制炎症因子释放和补体的过度激活相关。