鸟巢烷型二萜11-O-acetylcyathatriol对LPS诱导炎症反应的抑制作用及机制

摘要

脂多糖（LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分，它可以启动巨噬细胞，使其产生过量的一氧化氮等信使分子及肿瘤坏死因子-（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子。而炎症因子的过量释放会引起炎症反应的级联放大效应，造成机体的严重损伤，并且增加多种疾病发生率及死亡率。探究鸟巢烷型二萜11-O-acetylcyathatriol对LPS诱导炎症反应的抑制作用及其分子机制。
　　本研究用不同浓度的药物11-O-acetylcyathatriol处理小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过MTT的方法检测药物对此细胞的毒性作用，并选取出适当的用药浓度。采用Griess法检测药物对LPS诱导RAW264.7细胞释放一氧化氮的影响。通过ELISA法，检测11-O-acetylcyathatriol对LPS诱导RAW264.7细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6的抑制作用。采用Western blot法研究药物对iNOS、COX-2、IκB-α、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白表达水平的影响，探讨其在MAPKs或NF-?B炎症信号通路上的作用机制。最后，通过SD大鼠酒精性胃黏膜损伤体内模型研究11-O-acetylcyathatriol对胃黏膜损伤的保护作用。MTT实验结果显示11-O-acetylcyathatriol在0.78~25?M浓度范围内对 RAW264.7无明显细胞毒性。11-O-acetylcyathatriol对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7释放NO及IL-6具有显著的抑制作用。另外，这个化合物还能够显著下调LPS诱导的iNOS、COX-2蛋白高表达以及MAPK/p-38蛋白的磷酸化。体内动物实验表明，11-O-acetylcyathatriol对SD大鼠酒精性胃黏膜损伤具有明显的保护作用。11-O-acetylcyathatriol对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7释放炎症介质NO及IL-6具有显著的抑制作用，具有一定的抗炎活性。作用机制研究提示该化合物可能是通过下调iNOS、COX-2蛋白高表达，通过阻断MAPK/p-38炎症信号通路发挥抗炎作用。

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1前 言

1.1 真菌药用历史

1.2 鸟巢菌

1.3鸟巢菌的研究现状

1.4 液体发酵技术

1.5 立体依据及意义

2实验

2.1 菌种

2.2 主要实验试剂

2.3 主要实验仪器

2.4 主要溶液的配制

2.5 细胞培养

2.6 细胞存活力实验

2.7 NO分析

2.8 ELISA法

2.9 ELISA法测定TNF-α水平

2.10 ELISA法测定IL-6水平

2.11 蛋白的提取

2.12 Western Blot

2.13 11-O-acetylcyathatriol对SD大鼠酒精性胃黏膜损伤的保护作用

2.14 统计分析

3结果

3.1 MTT法测定11-O-acetylcyathatriol细胞毒性

3.2 对LPS诱导RAW 264.7细胞释放NO的抑制作用

3.3 对LPS诱导RAW 264.7细胞释放TNF-?的抑制作用

3.4对LPS诱导RAW 264.7细胞释放IL-6的抑制作用

3.5 Western blot实验结果

3.6 动物实验结果-对SD大鼠酒精性胃黏膜损伤的保护作用

4讨论

参考文献

致谢

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