山楂叶金丝桃苷对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

摘要

目的:探讨山楂叶金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及其可能的作用机制.方法:采用MTT法观察Hyp对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的影响,通过Griess法和ELISA法分别测定上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)水平,通过RT-PCR法检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA水平,通过Western blot法检测p38、Sirt6的蛋白表达和核转录因子 κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65的磷酸化水平,通过流式细胞术分析Hyp对细胞周期和凋亡的影响.结果:Hyp浓度在100μmol/L以内对RAW264.7细胞增殖无影响,确定0～100μmol/L为Hyp的安全浓度范围.Hyp较模型组显著降低促炎因子NO、TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS含量,Hyp能够明显减少TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA水平.此外,Hyp较模型组显著上调Sirt6表达,下调p38、NF-κB p65的磷酸化水平.分子对接结果表明,山楂叶提取物Hyp能够与p38MAPK结合并通过氨基酸残基Asp168、Lys53,His107等发生相互作用.此外,Hyp能够显著抑制LPS诱导的细胞凋亡并使其阻滞在S期.结论:Hyp能够抑制LPS诱导巨噬细胞促炎因子的释放,其作用可能与调控p38MAPK/Sirt6/NF-κB信号通路有关.