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摘 要
1 文献综述
1.1 红花简介
1.1.1 形态学特性
1.1.2 生态学特性与分布
1.1.3 化学成分及研究现状
1.1.4 红花黄色素提取方法研究进展
1.1.5 红花黄色素分离纯化方法研究进展
1.1.6 红花黄色素药理研究进展
1.2 阿尔兹海默病简介
1.2.1 概述
1.2.2 发病机制
1.2.3 治疗现状
1.1.3 阿尔兹海默病研究模型
1.3 Tau蛋白与AD
1.4 SH-SY5Y细胞
1.5 线粒体氧化损伤与AD
1.6 本研究的内容和意义
2 红花黄色素B的分离与纯化
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 药品与试剂
2.1.2 实验仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 色谱条件的建立
2.2.2 红花黄色素B提取分离工艺流程
2.2.3 红花黄色素的提取
2.2.4 红花黄色素B的分离
2.2.5 红花黄色素B的纯化
2.3 实验结果
2.3.1 红花黄色素提取结果
2.3.2 红花黄色素经大孔吸附树脂AB-8纯化结果
2.3.3 红花黄色素B经Sephadex LH-20纯化结果
2.4 实验讨论
3 SH-SY5Y细胞分化为成熟神经元及冈田酸损伤模型的建立
3.1 实验材料与仪器
3.1.1 细胞株
3.1.2 药品与试剂
3.1.3 实验仪器与设备
3.2 主要试剂配制
3.2.1 ATRA溶液的配制
3.2.2 MTT溶液的配制
3.2.3 OA溶液的配制
3.2.4 吉姆萨溶液的配制
3.2.5 Hoechst 33342荧光探针配制
3.2.6 Western blot工作液的配制
3.3 实验方法
3.3.1 细胞复苏、传代、培养
3.3.2 ATRA诱导SHSY5Y细胞分化
3.3.3 吉姆萨染色观察细胞形态
3.3.4 流式细胞术检测细胞周期
3.3.5 MTT法检测OA对SH-SY5Y细胞存活率的影响
3.3.6 OA致分化SH-SY5Y细胞为Tau蛋白过度磷酸化阿尔兹海默病模型
3.3.7 Western blot 检测 p-Tau蛋白表达
3.4 数据处理
3.5 实验结果
3.5.1 ATRA诱导细胞分化
3.5.2 OA致成熟神经元损伤
3.6 实验讨论
4 三种红花黄色素对成熟神经元突触损伤的影响
4.1 实验材料与仪器
4.1.1 细胞株
4.1.2 药品与试剂
4.1.3 实验仪器与设备
4.2 主要试剂的配制
4.2.1 三种红花黄色素溶液
4.2.2 MTT溶液的配制
4.3 实验方法
4.3.1 细胞复苏、传代、培养
4.3.2 MTT法检测三种红花黄色素对SH-SY5Y细胞存活率的影响
4.3.3 吉姆萨染色观察细胞形态
4.3.4 Western blot 检测三种红花黄色素对p-Tau蛋白表达的影响
4.4 数据处理
4.5 实验结果
4.5.1 三种红花黄色素对细胞存活率的影响
4.5.2 三种红花黄色素对OA所致分化成熟神经元损伤的保护作用
4.5.3 Western bloting 检测p-Tau蛋白表达
4.6 实验讨论
5 红花黄色素对成熟神经元突触损伤的保护作用机制
5.1 实验材料与仪器
5.1.1 细胞株
5.1.2 药品与试剂
5.1.3 实验仪器与设备
5.2 主要试剂配制
5.2.1 三种红花黄色素溶液的配制
5.2.2 荧光探针溶液的配制
5.3 实验方法
5.3.1 细胞复苏、传代、培养
5.3.2 两个时间点细胞处理方法
5.3.3 DCFH-DA检测细胞总活性氧
5.3.4 JC-1检测细胞线粒体膜电位
5.3.5 Mito SOX检测细胞线粒体源活性氧
5.3.6 MitoTracker??Green FM检测线粒体数量
5.3.7 ATP含量检测
5.4 数据处理
5.5 实验结果
5.5.1 红花黄色素影响细胞内总活性氧
5.5.2 红花黄色素影响线粒体源活性氧
5.5.3 红花黄色素影响线粒体膜电位
5.5.4 红花黄色素影响线粒体数量
5.5.5 红花黄色素影响细胞内ATP含量
5.6 实验讨论
总结
参考文献
致 谢
附录1 攻读学位期间发表的学术论文
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