摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
1.1 亲和色谱
1.1.1 亲和色谱的发展历史
1.1.2 亲和色谱的原理及组成
1.1.3 亲和色谱的种类及其研究进展
1.1.4 亲和色谱的应用与发展
1.2 木瓜蛋白酶
1.2.1 木瓜蛋白酶的结构与催化机理
1.2.2 木瓜蛋白酶的开发与应用
1.2.3 木瓜蛋白酶的分离纯化
1.3 本论文的研究目的和研究内容
1.3.1 研究目的
1.3.2 研究内容
参考文献
第二章 化学法制备染料亲和膜色谱新介质及其表征
2.1 概述
2.2 实验部分
2.2.1 原料与试剂
2.2.2 主要仪器
2.2.3 染料亲和膜的制备
2.2.4 物理性能测定
2.2.5 非特异性吸附性能测定
2.2.6 染料泄漏测定
2.2.7 再生性实验研究
2.3 结果与分析
2.3.1 酸水解条件优化
2.3.2 物理性能表征
2.3.3 非特异吸附性能研究
2.3.4 染料亲和膜染料泄漏研究
2.3.5 再生性能研究
2.4 小结与讨论
参考文献
第三章 染料亲和膜对模型蛋白木瓜蛋白酶的吸附性能和吸附机理研究
3.1 概述
3.2 实验部分
3.2.1 原料与试剂
3.2.2 主要仪器
3.2.3 静态吸附试验
3.2.4 静态吸附法研究染料亲和膜的吸附性能
3.2.5 动态脱附法研究染料亲和膜的吸附性能
3.2.6 染料亲和膜对木瓜蛋白酶的吸附机理研究
3.2.7 染料亲和膜纯化木瓜蛋白酶
3.3 结果与分析
3.3.1 木瓜蛋白酶标准曲线测定
3.3.2 静态法吸附法研究染料亲和膜的吸附性能
3.3.3 动态脱附法研究染料亲和膜的吸附性能
3.3.4 染料亲和膜对木瓜蛋白酶的吸附机理研究
3.3.5 染料亲和膜纯化木瓜蛋白酶
3.4 小结与讨论
参考文献
第四章 生物法制备七肽配基色谱新介质及其表征
4.1 概述
4.2 实验部分
4.2.1 原料与试剂
4.2.2 主要仪器
4.2.3 主要培养基和溶液的配置
4.2.4 噬菌体宿主细菌的培养与保存
4.2.5 噬菌体宿主细菌的生长曲线绘制与其菌体含量的关系曲线绘制
4.2.6 噬菌体滴度测定
4.2.7 木瓜蛋白酶亲和七肽配基的筛选
4.2.8 酶联免疫吸附检测(ELISA)
4.2.9 DNA测序
4.2.10 交联噬菌体七肽亲和吸附介质的制备
4.2.11 物理性能表征
4.3 结果与分析
4.3.1 噬菌体宿主菌ER 2738的培养与生长曲线分析
4.3.2 影响木瓜蛋白酶亲和七肽配基筛选因素分析
4.3.3 木瓜蛋白酶亲和七肽配基的筛选结果分析
4.3.4 酶联免疫吸附检测(ELISA)结果分析与DNA测序
4.3.5 交联噬菌体七肽亲和吸附介质的制备及其表征
4.4 小结与讨论
参考文献
第五章 交联噬菌体七肽亲和吸附介质对模型蛋白木瓜蛋白酶的吸附性能及吸附机理研究
5.1 概述
5.2 实验部分
5.2.1 原料与试剂
5.2.2 主要仪器
5.2.3 主要培养基和溶液的配置
5.2.4 溶液的配制
5.2.5 标准曲线绘制及蛋白含量测定
5.2.6 木瓜蛋白酶酶活测定
5.2.7 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
5.2.8 静态吸附法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能
5.2.9 响应面法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能
5.2.10 动态脱附法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能
5.2.11 噬菌体七肽亲和介质对木瓜蛋白酶的吸附机理研究
5.2.12 噬菌体七肽亲和介质分离纯化木瓜蛋白酶
5.3 结果与分析
5.3.1 静态吸附法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能
5.3.2 响应面法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能及其模型分析
5.3.3 动态脱附法研究噬菌体七肽亲和介质的吸附性能
5.3.4 噬菌体七肽亲和介质对木瓜蛋白酶的吸附机理研究
5.3.5 噬菌体七肽亲和介质分离纯化木瓜蛋白酶
5.4 小结与讨论
参考文献
第六章 七肽配基对模型蛋白木瓜蛋白酶的抑制机理研究
6.1 概述
6.2 实验部分
6.2.1 原料与试剂
6.2.2 主要仪器
6.2.3 主要培养基和溶液的配置
6.2.4 木瓜蛋白酶活力的测定
6.2.5 七肽抑制木瓜蛋白酶酶活性的动力学分析
6.2.6 七肽抑制剂与木瓜蛋白酶的抑制机理研究
6.3 结果与分析
6.3.1 七肽分子与木瓜蛋白酶相互作用
6.3.2 七肽分子对木瓜蛋白酶的影响
6.3.3 七肽分子对木瓜蛋白酶的抑制作用机理
6.3.4 七肽分子对木瓜蛋白酶的抑制动力学分析
6.4 小结与讨论
参考文献
全文总结
论文创新点
展望
博士期间已发表,接受和投递的论文及专利申请
致谢