miR--106b通过SOCS7调节PBC患者PBMC中1型干扰素信号通路

摘要

原发性胆汁性肝硬化一种典型的器官特异性自身免疫性疾病，病原体的感染可能是其发病的一个重要因素。Ⅰ型干扰素主要包括IFN-α和IFN-β，它们具有抑制病毒复制的免疫学功能。当机体受到病原体感染时，机体通过一系列途径启动Ⅰ型干扰素的表达，从而通过炎症反应的方式非特异性清除入侵机体的病原体。然而，Ⅰ型干扰素反应是一把“双刃剑”，适当的反应有助于病原体的清除而反应亢进则会造成机体的免疫病理损伤。研究表明Ⅰ型干扰素反应亢进可能会引起自身免疫性疾病。细胞因子信号抑制分子(SOCS)是一类可以通过多种途径对细胞因子的信号转导进行负向调控的蛋白分子。有研究指出SOCS可以通过JAK/STAT信号通路调节Ⅰ型干扰素的生物学功能。本课题旨在研究Ⅰ型干扰素信号通路调节的异常在PBC发病机制中的作用。本研究共分为四个部分。 第一部分 PBC患者外周血单个核细胞内Ⅰ型干扰素信号通路亢进 以往有研究发现自身免疫性疾病中Ⅰ型干扰素信号通路亢进的现象，但是其与原发性胆汁性肝硬化发病机制之间的关系尚不明确。在本部分研究中，我们采用ELISA法检测了PBC患者血清中IFN-α和IFN-β水平，以RT-PCR检测了PBC患者PBMC中干扰素诱导基因(ISG) MX1、OAS1和ITIF3的表达。我们发现PBC患者外周血IFN-α和IFN-β水平较健康个体明显增高;PBMC中MX1、OAS1和ITIF3的表达也明显增高。这些结果提示Ⅰ型干扰素信号通路亢进是PBC发病机制的重要特征。 第二部分 PBC患者外周血PBMC中SOCS7表达变化 以往的研究表明SOCS家族分子是极为重要的Ⅰ型干扰素信号通路负向调节因子。为明确PBC患者Ⅰ型干扰素信号通路亢进是否与SOCS家族的分子有关。我们首先以外源性的IFN-α和IFN-β刺激PBC患者的PBMC，以RT-PCR法检测SOCS7 mRNA、ISG mRNA的表达，以免疫印迹检测SOCS7蛋白的表达。分析了PBC患者和健康个体外周血中SOCS7表达水平的变化，PBC患者外周血SOCS7的表达与健康个体差异显著。通过上调和下调SOCC7的表达来研究SOCS7对Ⅰ型干扰素信号通路的调节作用。我们发现，外源性的IFN-α和IFN-β可以上调PBMC中SOCS7和ISG的表达。上调SOCS7的表达可以抑制ISG的表达而下调SOCS7的表达可以促进ISG的表达。同时我们用免疫组化法检测到PBC患者肝脏浸润的淋巴细胞表达SOCS7，这就表明在PBC患者肝脏浸润的淋巴细胞可能会受到SOCS7的调节。本部分实验结果表明:PBC患者中SOCS7表达“迟钝”，导致Ⅰ型干扰素信号通路没有得到应有的抑制，是导致PBC患者Ⅰ型干扰素信号通路亢进的原因。 第三部分 SOCS7是miR-106b的作用靶点 为研究microRNA是否参与了调节SOCS7的表达，我们首先以生物信息学软件对可能作用于SOCS7的靶点进行了预测，结果发现miR-106b可以作用于SOCS7。我们进一步采用报告基因技术证实了miR-106b可以与SOCS7 mRNA的3'UTR发生相互作用。Ⅰ型干扰素不能上调miR-106b的表达。最后我们将miR-106b的前体和抑制体转染入PBC患者的PBMC，结果发现其可以调节SOCS7和ISG的表达。本部分研究结果表明，PBC患者PBMC中SOCS7表达降低可能与miR-106b有关。 第四部分 PBC患者ISG、miR-106b和SOCS7的相关性分析 为明确前三部分体外研究的结论，我们对PBC患者PBMC中Ⅰ型干扰素、ISG、miR-106b和SOCS7进行了相关性分析。结果表明，PBC患者较健康个体PBMC中miR-106b表达水平明显降低，且与SOCS7水平呈负相关，与ISG呈正相关。Ⅰ型干扰素与SOCS7呈正相关，与miR-106b的ISG之间的相关性无统计学意义。SOCS7 mRNA与OAS1、MX1和ITIF3之间均存在负相关关系。这些结果表明，在PBC患者外周血中，miR-106b可能通过SOCS7而调节了ISG的表达。 结论 我们的研究结论表明，正常情况下，高水平的Ⅰ型干扰素对诱导细胞上调SOCS7的表达起着重要作用。SOCS7表达上调的意义在于抑制Ⅰ型干扰素信号通路的强度。这种反馈调节机制对于机体免遭自身免疫性疾病具有极为重要的意义。然而，PBC患者PBMC中miR-106b表达增高，导致SOCS7表达降低，虽然PBC患者外周血存在高水平Ⅰ型干扰素，但仍然不能上调SOCS7的表达，最终导致Ⅰ型干扰素通路亢进。因此，miR-106b可能是PBC潜在的治疗靶点。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 PBC患者外周血单个核细胞内Ⅰ型干扰素信号通路亢进

前言

一、材料和方法

二 实验方法

三、结果

讨论

第二部分 PBC患者外周血PBMC中SOCS7表达变化

前言

一、材料和方法

二、实验方法

三、结果

讨论

第三部分 SOCS7是miR-106b的作用靶点

前言

一 材料和方法

二 结果

讨论

第四部分 PBC患者ISG、miR-106b和SOCS7的相关性分析

前言

一 材料和方法

二、结果

讨论

总结全文

参考文献

综述(一) 细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)与免疫调节的研究

综述(二) microRNA-146a与免疫调控

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