转录因子SALL4对CD133阳性结直肠癌干细胞干性表达的调节

摘要

结直肠癌(CRC)是全世界与癌症相关的第三大死因。结直肠癌只有在早期、淋巴结阴性阶段时，通过手术彻底切除，才可能实现长期生存。在疾病晚期，近50％的患者会出现复发或转移，因此目前迫切需要去探究肿瘤复发转移的机制。 越来越多的证据表明，肿瘤细胞中存在一个亚群，具有独特的干细胞样特性，负责肿瘤起始、浸润性生长和转移形成，这个亚群被定义为肿瘤干细胞(CSCs)。近期研究表明肿瘤干细胞存在于多种肿瘤类型中，其中包括结直肠癌，也报道了几个结直肠癌肿瘤干细胞的标志物:CD133、CD44、Lgr5和ALDH1A1等。针对这几个因子的靶向治疗将通过改变肿瘤干细胞自我更新和分化的平衡抑制肿瘤生长，这是很有用的。 转录因子SALL4同OCT4、SOX2和NANOG类似，调节胚胎和造血干细胞的”干”性。最近的研究发现SALL4在实体肿瘤中同样发挥关键作用，如:肝癌、胃癌和子宫内膜癌等。SALL4与恶性肿瘤的关系尚不明了，我们研究的目的是探讨SALL4在调节结直肠癌肿瘤干细胞干性中的作用。 本课题分为两个部分:(1) SALL4在结直肠癌中的表达与临床病理联系;(2)SALL4对CD133+结直肠癌干细胞干性表达的调节。 第一部分 SALL4在结直肠癌中的表达与临床病理联系 文献报道SALL4可以作为多种肿瘤细胞的有效的生物标志物。我们首先利用免疫组织方法检测了包含155例结直肠癌患者的术后病理组织芯片中SALL4的表达，结合临床病理资料进行分析结果发现SALL4在肿瘤中高表达，而在癌旁沉默，且SALL4的高表达和结直肠癌的不良预后相关。CD133是结直肠癌肿瘤干细胞最常用的标志物，我们进一步分析了同一组组织切片中CD133的表达，发现SALL4和CD133的表达正相关，提示SALL4在结直肠癌中的作用可能与CD133的表达有关。为进一步确认SALL4与CD133在结直肠癌中的相关性，我们利用RT-PCR检测了50例结直肠癌新鲜冰冻组织中CD133和SALL4的mRNA表达及其相关性，发现在组织中CD133和SALL4的mRNA水平表现为正相关。 第二部分 SALL4对CD133+结直肠癌干细胞干性表达的调节 我们在三种结肠癌细胞系HCT116、RKO、SW620中分别检测SALL4和CD133在基因水平及蛋白水平的表达，结果发现两者表现出相同的表达趋势。此外免疫荧光染色证实CD133阳性的HCT116细胞多数表现为SALL4表达阳性，两者出现共染。利用流式细胞仪分选HCT116细胞，将其分为CD133+和CD133-两个亚群，检测这两亚群细胞中SALL4的表达存在明显差异，CD133+HCT116细胞中Sall4的表达远高于CD133-HCT116细胞。 为验证SALL4对于结直肠癌干细胞干性的调节，我们利用SALL4低表达的细胞系RKO中感染慢病毒包被的SALL4过表达基因，检测转染后的细胞中SALL4的基因及蛋白表达证实感染有效，感染后我们发现结直肠癌干细胞标志物CD133、Lgr5的表达增加，细胞克隆形成能力、成瘤能力明显增强。向高表达CD133的HCT116细胞中转染慢病毒包被的短发夹RNA阻断SALL4表达，发现细胞的干细胞表型下降。说明SALL4可调节结直肠癌肿瘤干细胞表型，并影响细胞的增值能力和成瘤能力。 结果: 1.转录因子Sall4在结直肠癌中高表达，并提示不良预后; 2.Sall4在结直肠癌中的表达与CD133的表达相关; 3.Sall4可以正性调节结直肠癌肿瘤干细胞的干性。

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声明

摘要

英文缩略词表

前言

参考文献

第一部分 SALL4在结直肠癌中的表达及临床病理联系

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

第二部分 SALL4对CD133+结肠癌干细胞干性表达的调节

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

肠肿瘤干细胞的研究进展

致谢