孕酮降低子痫前期大鼠交感中枢氧化应激水平的作用机制研究

摘要

目的:
　　妊娠期高血压疾病的重要分类之一-子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，为产科常见并发症，严重危害母婴健康。但目前其病因及发病机制仍不十分明确，临床缺乏有效的预防及治疗措施。研究表明PE患者存在交感神经活动异常亢进，且它是导致PE患者心血管功能紊乱的重要机制之一。脑于交感中枢头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)及所含的前交感神经元在维持基础血压和交感神经活动中起到关键作用。RVLM氧化应激(oxidativestress)增强与高血压等心血管疾病的发生发展密切相关。我们前期的实验已经证实，RVLM氧化应激水平的增强是子痫前期大鼠交感神经活动亢进和心血管功能紊乱的中枢机制之一。研究表明血浆孕激素水平的降低与PE心血管功能紊乱的发生发展关系密切，且补充孕激素能够明显改善PE患者的临床症状。目前为止孕酮改善PE心血管功能这一结论仍然备受争议，且其具体机制尚未明确。为进一步探索孕酮改善PE的可能机制以及为其预防及治疗提供新的思路，本实验的主要目标是明确孕酮对PE动物模型上RVLM区超氧阴离子含量的作用和机制。
　　方法:
　　使用醋酸去氧皮质酮(DOCA)腹腔注射及生理盐水(saline)喂养怀孕SD大鼠构建PE动物模型（PDS组），同时设立Con组（nonpregnant animals）、DS组（nonprgnant animals receiving DOCA and saline）及NP组(normal pegnantanimals)作为对照，通过监测大鼠血压(MAP)、心率(HR)、肾交感放电活动(RSNA)、24小时尿蛋白含量等指标评价模型的建立;将PDS组及NP组随机各分出两个亚组，予以腹腔注射孕激素（己酸羟孕酮，17-OHPC）或者芝麻油（溶剂对照，Veh），分为NP+Veh组、NP+17-OHPC组、PDS+Veh组及PDS+17-OHPC组;Elisia试剂盒检测大鼠血清及脑脊液中孕酮含量;大鼠RVLM区DHE探针荧光染色检测超氧阴离子含量;western blot检测氧化应激相关蛋白NADPH氧化酶NOX4及过氧化物歧化酶SOD1的表达变化，同时检测1型血管紧张素Ⅱ受体AT1R、核孕酮受体nPGR-A及nPGR-B的表达改变。
　　结果:
　　1.子痫前期大鼠模型的建立:与Con组、DS组及NP组相比，PDS组（子痫前期模型组）平均动脉压升高、心率升高、肾交感放电活动增强、24小时尿蛋白含量升高(P＜0.05)。
　　2.与NP组相比，PDS组血清及脑脊液中孕酮浓度均明显降低(p＜0.05)。使用孕激素（己酸羟孕酮，17-OHPC）3.32 mg/kg计量单次腹腔注射(PDS+17-OHPC)3天后，二者浓度均明显升高(p＜0.05)。
　　3.孕激素处理3天后，子痫前期大鼠心血管指标明显下降:与PDS+Veh组相比，PDS+17-OHPC组的平均动脉压、肾交感放电活动及24小时尿蛋白含量均明显降低(P＜0.05)。
　　4.使用DHE探针荧光染色法检测RVLM超氧阴离子含量，结果表明PDS组RVLM平均荧光密度统计值明显增强(P＜0.05)，而孕激素处理后超氧阴离子含量降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　5.子痫前期模型组RVLM区氧化应激相关蛋白AT1R和NOX4表达上调(P＜0.05)，孕激素处理后二者均明显下调(P＜0.05);子痫前期模型组RVLM核孕酮受体nPGR-B表达明显增多(P＜0.05)，孕激素处理后其表达下调(P＜0.05)。
　　结论:
　　孕酮通过降低RVLM区氧化应激机制改善子痫前期大鼠心血管功能，且与AT1、NOX4、nPGRB蛋白的下调有关。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

材料与方法

一、实验动物

二、主要实验仪器和试剂

三、实验方法

实验结果

一、子痫前期大鼠模型的建立

二、子痫前期动物模型的评价

三、补充孕激素对心血管功能的影响

四、大鼠RVLM区DHE探针荧光染色法检测超氧阴离子含量

五、大鼠RVLM区氧化应激相关蛋白的表达检测

六、大鼠RVLM区核孕酮受体蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

综述 孕激素与妊娠期高血压疾病

在读期间发表的论文

致谢