去透明带小鼠早期胚胎的体外培养

摘要

本研究以昆白小鼠为实验对象，对早期胚胎体外培养液进行筛选和培养条件的优化。在此基础上，通过比较WOW法和琼脂包埋法对无透明带胚胎培养的影响，从中选择更有利于去透明带胚胎培养的方法。目的是建立一种在本实验室环境下利于去透明带小鼠早期胚胎体外培养的方式，为最终降低小鼠核移植操作难度并提高其效率完成基础性的工作。实验主要结果如下： 1.用4种组成成分不同的常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养，观察到4种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30.5％～43.5％，差异不显著。KSOM组囊胚率为40.9％，显著高于其它各组(27.9％～30.0％)。 2.分别采用KSOM和KSOMFBS两种培养液，对小鼠早期胚胎与输卵管上皮细胞(MOEC)或卵丘细胞(CC)进行共培养，观察从2-细胞发育到4-细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果显示：共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显，输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。添加胎牛血清组效果明显好于不添加组效果。 3.用WOW(Thewellofthewell)培养法和琼脂包埋培养法对去透明带小鼠原核胚进行培养，统计去透明带原核胚的囊胚发育率、囊胚回收率和囊胚细胞数。用WOW法培养去透明带小鼠原核胚，其囊胚发育率(29.6％)与琼脂包埋培养法(34.7％)相比差异不显著，但前者的囊胚回收率(80.3％)和囊胚细胞数(36)显著低于后者(90.5％，46)。结果表明：琼脂包埋培养是去透明带小鼠早期胚胎体外培养的较好方法。 4.采用琼脂包埋无透明带原核胚，直接培养(非共培养)或与输卵管上皮细胞共培养。非共培养的2-细胞胚胎比率(86.4％)与琼脂包埋培养的2-细胞胚胎比率(88.7％)相比差异不显著；但是突破2-细胞发育阻滞的胚胎率，共培养组(46.9％)高于非共培养组(37.2％)，差异显著；囊胚的发育率，共培养组(44.3％)显著高于非共培养组(34.7％)。结果表明：琼脂包埋培养法结合共培养可以提高去透明带小鼠早期胚胎体外培养的发育率。

目录

文摘

英文文摘

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文献综述 第一章胚胎共培养与哺乳动物胚胎发育

实验研究 第二章小鼠胚胎培养液的筛选及共培养对其发育的影响

实验研究 第三章去透明带胚胎体外培养

结论

参考文献

附录

致谢

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