影响油桃（Prunus persica var.nectarina）茎尖培养和胚轴再生因子的研究

摘要

桃的常规育种周期长、工作量大，且很难取得令人满意的结果。随着现代生物技术和基因工程的发展，可有目的地改良某些优良品种的不良性状，在较短时间内得到新品种，从而提高育种效果，而建立高效稳定的再生体系一直是桃基因工程发展所需要攻克的难题之一。 本研究以早熟油桃品种华光、曙光以及中熟油桃品种秦光为试材，对影响其茎尖初代培养和继代增殖的主要因素进行试验，旨在为油桃茎尖快繁体系的建立提供更加精确的试验依据。还以秦光种胚胚轴为试材，对其进行离体培养，诱导获得了不定芽。并对下胚轴再生的愈伤组织进行抗氧化酶的测定分析，初步进行了不定芽再生在细胞水平上的研究。研究结果如下： 1.华光、曙光和秦光三种油桃茎尖培养最适宜的取材时期为新梢萌发期，试材为萌发新梢的顶端嫩芽，污染率低，利于成活。用75％酒精30s+0.1％升汞1min+饱和次氯酸钠5min对油桃茎尖进行消毒处理效果最好。 2.茎尖初代培养适合的培养基组合为：华光和秦光G+6-BA 0.50 mg/L，+IBA0.50mg/L，成活率分别为98.15％和72.34％；曙光G+6-BA 0.50 mg/L+IBA0.125mg/L，成活率为91.72％。 3.茎尖培养适合的增殖培养基组合为：华光和曙光G+6-BA 2.00 mg/L+IBA0.25mg/L，增殖的平均有效芽数为2.36，2.89；秦光G+6-BA 1.50 mg/L+IBA0.50mg/L，增殖的平均有效芽数为3.16。 4.中熟油桃秦光经过7天常温光下预培养所得下胚轴适宜做再生的外植体；下胚轴形态学上部再生能力较下部差异显著；下胚轴暗培养7-14天左右较适宜诱导产生愈伤组织，进而产生不定芽，平均不定芽数也较其他处理高。 5.秦光油桃下胚轴再生以G+TDZ2.5mg/L+NAA0.5mg/L的培养基效果最好，再生率达到38.89％。 6.秦光油桃下胚轴再生过程中，在愈伤组织分化不定芽的前期，SOD活性逐渐升高，14d时SOD活性达到最高值，随后SOD活性开始下降；而POD和CAT的活性在愈伤组织开始分化的前期迅速降低，在7-14天之间基本维持在相对稳定的水平。到不定芽生长后期，两者的活性又迅速上升。

目录

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第一章文献综述

1.1核果类果树组织培养的研究进展

1.1.1茎尖培养

1.1.2胚培养

1.1.3再生体系的建立与应用

1.1.4原生质体培养与细胞融合

1.1.5愈伤组织发生与状态调控研究

1.2桃基因转化研究进展

1.2.1农杆菌介导法转化桃基因

1.2.2基因枪轰击法转化桃基因

1.3本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1茎尖培养

2.1.1试验材料

2.1.2试验方法

2.2种胚萌发试验

2.2.1试验材料

2.2.2试验方法

2.3下胚轴的再生

2.3.1试验材料

2.3.2试验方法

2.4下胚轴再生过程中抗氧化酶活性测定

2.4.1试验材料

2.4.2试验设置

2.4.3抗氧化酶活性测定

2.5培养基的制备和培养条件

2.6试验数据的记录与处理

第三章结果与分析

3.1茎尖培养

3.1.1不同取材时期及接芽状态对茎尖初代培养的影响

3.1.2不同消毒处理组合对茎尖初代培养的影响

3.1.3不同浓度的IBA对茎尖初代培养的影响

3.1.4不同基本培养基对茎尖增殖的影响

3.1.5不同激素浓度组合对茎尖增殖的影响

3.2下胚轴再生

3.2.1形态学位置对胚轴再生不定芽的影响

3.2.2不同预培养时间对下胚轴再生不定芽的影响

3.2.3不同暗培养时间对下胚轴再生不定芽的影响

3.2.4不同基本培养基对下胚轴再生不定芽的影响

3.2.5不同激素浓度组合对下胚轴再生不定芽的影响

3.3秦光油桃下胚轴再生过程中抗氧化酶活性的变化

第四章讨论

4.1取材时期对茎尖初代培养的影响

4.2茎尖增殖试验中存在的问题

4.3细胞分裂素TDZ对下胚轴再生的影响

4.4下胚轴再生试验中存在的问题

4.5秦光油桃下胚轴再生过程中抗氧化酶活性的变化

第五章结论

5.1茎尖培养

5.2秦光油桃下胚轴再生

5.3秦光油桃下胚轴再生过程中抗氧化酶活性的变化

参考文献

附 录

致 谢

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