冬青卫矛内生真菌筛选及其代谢产物的农药活性研究

摘要

植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物，是新活性化合物的潜在资源，在农业医药行业中具有重要的应用前景。本研究对冬青内生真菌进行分离并对其次生代谢产物进行了农用活性筛选。主要研究结果如下： 1.采用组织培养法从冬青卫矛(Euonymus japonicus)中分离到49株植物内生真菌，经初筛和复筛，筛选出一株具有杀菌活性的菌株M-1。 2.对M-1菌株发酵液进行了杀菌活性研究。M-1菌株发酵液对番茄早疫病菌(Alernaria solani)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)和苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloesporioides)菌丝生长抑制率达到80.3％、78.5％和87.8％。M-1菌株发酵液对枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为23.0mm、20.0mm、16.0mm和20.0mm。M-1发酵液的乙酸乙酯萃取物对苹果炭疽病菌的毒力最高，IC50值为63.6μg/mL。Doskochilova溶剂系统鉴定表明M-1菌株的发酵液中含有硫藤黄菌素类抗生素。 3.通过单因子实验获得了冬青卫矛内生真菌菌株M-1摇瓶发酵的最佳培养条件。最佳培养基配方和发酵条件为20％胡萝卜、2％葡萄糖、0.4％酵母粉、0.2％MgS04和0.2％ZnSO4，培养温度26℃，接种量：每100 mL发酵液18块菌饼，装液量为110/250mL，初始pH为7.5左右，发酵时间240h。 4.根据真菌的分类及鉴定方法，对比相关分类系统，将M-1菌株初步鉴定为半知菌亚门，链格孢属(Alternaria)真菌。

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第一章文献综述

1.1植物内生真菌的抗虫活性及其杀虫活性物质研究进展

1.1.1禾本科植物内生真菌的抗虫活性及其杀虫活性物质

1.1.2木本植物内生真菌的抗虫活性及杀虫活性物质

1.2植物内生真菌的抗病活性及其抑菌活性物质研究进展

1.3内生菌促进植物生长作用

1.4植物内生菌在防治植物病虫害中存在的问题和前景展望

1.5冬青卫矛研究概况

1.6论文的研究目的意义

1.7论文设计思路

第二章冬青卫矛内生真菌产农药活性菌株的筛选

2.1材料和方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1表面消毒效果

2.2.2内生真菌的分离结果

2.2.3对49株内生真菌的抑菌活性筛选结果

第三章冬青卫矛内生真菌M-1菌株代谢产物的杀菌活性及菌株鉴定

3.1试验材料

3.1.1供试菌株

3.1.2供试病原菌

3.1.3供试植物

3.1.4培养基

3.1.5主要试剂与仪器

3.2实验方法

3.2.1对病原细菌的抑制作用

3.2.2对几种敏感农用真菌的毒力测定

3.2.3离体果实针刺法测定发酵液对番茄灰霉的抑制作用

3.2.4发酵液中活性物质的Doskochilova溶剂系统鉴定

3.2.5 M-1菌株的初步鉴定

3.3结果与分析

3.3.1M-1菌株发酵液对病原细菌的抑制作用

3.3.2 M-1菌株发酵产物对几种敏感农用真菌的毒力测定结果

3.3.3抑制孢子萌发的毒力测定结果

3.3.4离体果实法生测结果

3.3.5 M-1菌株发酵液中活性物质的Doskochilova溶剂体系

3.3.6 M-1菌株初步分类鉴定结果

3.4讨论与小结

第四章M-1菌株发酵条件的优化

4.1试验材料

4.1.1出发菌株

4.1.2培养基

4.1.3试剂和仪器

4.2试验方法

4.2.1菌种培养

4.2.2摇瓶培养

4.2.3发酵培养基优化

4.2.4 M-1菌株发酵条件的研究

4.3结果与分析

4.3.1发酵培养基配方的选择

4.3.2发酵条件的优化

4.4讨论与小结

第五章结论

参考文献

附图

致谢

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