EGF和EGFR在牛发情周期卵巢组织的定位和表达研究

摘要

表皮生长因子(EGF)是EGF家族重要的调节因子之一，有关其在动物生殖调控方面的研究表明，EGF通过与表皮生长因子受体（EGFR）的EGF结构域结合，可以有效地抑制卵泡细胞的凋亡、促进颗粒细胞的增殖和卵母细胞的成熟，以诱导排卵过程。而明确卵巢内卵泡的发育过程和调控机理对于提高雌性动物的繁殖力、培育优秀后代具有重要的意义。目前，尚无有关EGF和EGFR在奶牛卵巢中的表达分布和功能意义的系统研究。本试验运用组织学制片方法和透射电镜技术对奶牛发情周期卵巢卵泡的显微结构和超微结构进行观察，通过免疫组织化学染色技术对奶牛发情周期卵巢内各级卵泡及黄体中EGF和EGFR进行细胞定位观察和相对表达量分析，运用RT-PCR技术对卵巢各级卵泡中EGFR mRNA的表达规律进行研究，以探讨其在奶牛发情周期卵巢卵泡发育过程中的功能意义。得到以下结果： 1.在发情末期，无黄体卵巢中的次级卵泡比有黄体卵巢中的多，但在发情周期中，各级卵泡的形态在两种卵巢中并无明显差异。透射电镜观察发现，在原始卵泡阶段，卵母细胞与周围颗粒细胞间已经存在桥粒结构，随着卵泡生长，卵母细胞与周围颗粒细胞间形成间隙连接；卵母细胞表面的微绒毛结构在生长卵泡阶段大量出现。 2.在牛发情周期卵巢中，EGF和EGFR在卵泡中的相对蛋白和mRNA表达量在发情周期的不同天数中呈规律性变化。卵泡生长波开始的初期阶段，EGF及其受体在三级卵泡中的相对蛋白表达量较其他卵泡高，但EGFR mRNA在各级卵泡中表达无明显变化；在卵泡生长波开始后的卵泡生长阶段，EGFR mRNA在次级卵泡的表达增强；在卵泡生长波中期阶段（优势卵泡选择阶段），EGF和EGFR在三级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞中蛋白表达显著升高，且EGFR mRNA在无黄体卵巢的三级卵泡中表达量也显著升高；在有黄体卵巢中，卵泡的生长在黄体发育阶段受到抑制，当黄体处于退化阶段的时候，在此时出现的卵泡生长波中，EGF和EGFR在次级卵泡中的表达较初级、三级卵泡都更高。 研究结果表明，在卵泡早期发育阶段卵母细胞已经和周围的颗粒细胞有紧密的物质上的交换和信息上的交流。EGF和EGFR在发情周期卵巢中的蛋白及mRNA表达变化规律，提示其在卵泡生长波中对卵泡发育具有促进作用并可能介导优势卵泡的选择。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1. 奶牛卵巢组织形态学研究概况

1.2. EGF及EGFR与哺乳动物生殖

第二章 牛发情周期卵巢的形态学特征

2.1. 材料与方法

2.2. 方法

2.3. 结果

2.4. 讨论

2.5. 小结

第三章 EGF及EGFR在牛发情周期卵巢组织中的分布

3.1. 材料与方法

3.2. 方法

3.3. 结果

3.4. 讨论

3.5. 小结

第四章 EGFR在牛发情周期卵巢组织中mRNA表达量的检测

4.1. 材料与方法

4.2. 方法

4.3. 结果分析

4.4. 讨论

4.5. 小结

第五章 结 论

创新点及后续研究

创新点：

后续研究：

参考文献

致谢

个人简历