荔枝蜜的花源标识物及枣花蜜诱导HepG2细胞凋亡研究

摘要

荔枝蜜和枣花蜜是中国市场上较为常见的两大单花种蜂蜜。枣花蜜多产自中国北方地区，而荔枝蜜多产自南方地区。虽蜂蜜采自不同的植物源，色泽口感各有特色，但都具有丰富的营养价值。然而，目前对荔枝蜜和枣花蜜的研究却有所不足，对花源标识物的研究以及在细胞水平对有害细胞的作用均鲜有报道。鉴别蜂蜜花源标识物是判别蜂蜜真假、区分掺假蜂蜜的一种重要手段。而细胞活性研究则对了解蜂蜜的药用价值以及功能开发具有重要意义。因此，本课题围绕荔枝蜜的花源标识物和枣花蜜对HepG2人肝癌细胞的促凋亡作用进行初步探究。
　　1、构建了采自中国不同地区的13批荔枝蜜和13批枣花蜜的HPLC-DAD指纹图谱，获取相关系数矩阵数据，并对样品进行聚类分析。指纹图谱结果显示，荔枝蜜共有28个共有峰，枣花蜜共有32个共有峰。于荔枝蜜中发现2种化合物，枣花蜜中发现4种化合物可作为其花源标识物。聚类分析结果表明基于相关系数矩阵进行最远距离聚类可在一定程度上分析样品的地理源，为地理源差异研究提供支持。
　　2、对荔枝蜜中发现的2种花源标识物（B1和B2）进行分离纯化和结构鉴定。采用XAD-2吸附树脂和半制备型液相色谱分离，分别得到两种花源标识物22.5mg和4.7mg，经Q/TOF-MS验证，其分子量均为264，是脱落酸及其同分异构体。
　　3、对荔枝蜜和枣花蜜的体外抗氧化活性进行研究，分别测定了总酚含量、DPPH·清除能力和氧自由基清除能力(ORAC)。结果显示，枣花蜜的总酚含量高于荔枝蜜，均值为525.1±72.35mg GAE/kg。枣花蜜DPPH·清除率(IC50)均值和ORAC均值为32.55±4.16mg/mL和3.39±0.85μmol TE/g，明显高于荔枝蜜，且与总酚含量表现出正相关。因此，选择枣花蜜为研究对象进行下一步研究。
　　4、研究了枣花蜜对HepG2人肝癌细胞的促凋亡作用，并探究了其诱导凋亡的机制。结果显示，经枣花蜜处理的HepG2细胞活力会随着枣花蜜浓度的增加而下降。枣花蜜可以引发HepG2细胞凋亡，使其细胞核发生破裂，凋亡特征明显，且凋亡细胞比例与枣花蜜的浓度也表现出浓度正相关性。此外，枣花蜜会引起线粒体膜电位降低、增加Bax和Bad蛋白的表达量，降低Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达量。同时，抑癌基因p53的表达量也伴随处理浓度增大而增加，caspase-9和下游蛋白caspase-3表达上调，最终导致凋亡。可见，枣花蜜可能通过p53介导线粒体依赖途径诱导HepG2细胞凋亡。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 蜂蜜的成分

1．1．1 糖类

1．1．2 水分

1．1．3 有机酸

1．1．4 蛋白质

1．1．5 矿物质

1．1．6 维生素

1．1．7 挥发性物质

1．1．8 酚类化合物

1．2 蜂蜜的抗氧化活性

1．3 蜂蜜的花源标识物

1．4 荔枝蜜和枣花蜜的研究进展

1．5 研究意义和内容

1．5．1 研究的意义

1．5．2 研究的内容

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 蜂蜜样品

2．2．2 实验试剂与仪器

2．2．3 样品制备

2．2．4 色谱条件

2．2．5 方法学考察

2．2．6 数据分析

2．3 实验结果与讨论

2．3．1 方法学分析

2．3．2 荔枝蜜和枣花蜜指纹图谱构建

2．3．3 荔枝蜜和枣花蜜指纹图谱聚类分析

2．4 小结

第三章 荔枝蜜花源标识物的分离与纯化

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 荔枝蜜花源标识物研究

3．2．2 荔枝蜜花源标识物分离

3．2．3 荔枝蜜花源标识物结构鉴定

3．3 实验结果与讨论

3．3．1 荔枝蜜花源标识物研究结果

3．3．2 荔枝蜜花源标识物的分离和结构鉴定

3．4 小结

第四章 荔枝蜜和枣花蜜体外抗氧化活性研究

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 实验试剂与仪器

4．2．2 实验方法

4．3 实验结果与讨论

4．3．1 总酚含量

4．3．2 DPPH·清除率

4．3．3 氧自由基清除率(ORAC)

4．4 小结

第五章 枣花蜜对HepG2人肝癌细胞凋亡的研究

5．1 引言

5．2 实验部分

5．2．1 实验材料

5．2．2 实验试剂和仪器

5．2．3 实验方法

5．3 实验结果与讨论

5．3．1 HepG2细胞活力检测结果

5．3．2 Annexin V-FITC／PI染色法检测凋亡结果

5．3．3 Hoechst 33258染色法检测凋亡结果

5．3．4 线粒体膜电位检测结果

5．3．5 相关蛋白表达

5．4 小结

第六章 总结与展望

6．1 总结

6．2 展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的科研成果

致谢