黄曲霉毒素B1阻断HepG2细胞自噬流及诱导细胞凋亡的机制研究

目录

声明

第1 章 绪论

1.1 黄曲霉毒素的研究进展

1.1.1 黄曲霉毒素的来源及性质

1.1.2 黄曲霉毒素的致癌作用

1.1.3 黄曲霉毒素的代谢途径

1.1.4 黄曲霉毒素与HBV联合对肝细胞的损伤作用

1.1.5 黄曲霉毒素对遗传和表观遗传的损伤

1.1.6 黄曲霉毒素与其他真菌毒素的联合毒性

1.1.7 天然提取物对AFB1 毒性的缓解作用

1.1.8 黄曲霉毒素的限量标准

1.2 细胞自噬

1.2.1 细胞自噬的研究进展

1.2.2 自噬的机制

1.2.3 自噬的检测方法

1.2.4 黄曲霉毒素与自噬

1.3 溶酶体损伤

1.3.1 溶酶体的发现与形成

1.3.2 溶酶体的功能

1.3.3 溶酶体膜与溶酶体膜通透化

1.3.4 LMP与细胞凋亡

1.4论文的研究目的、意义和内容

1.4.1研究目的与意义

1.4.2研究内容

1.4.3技术路线图

第2 章 AFB1 暴露对HepG2 细胞自噬的影响

2.1 实验材料

2.1.1 细胞

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 AFB1 储备液的制备

2.2.2 HepG2细胞的培养、传代、冻存

2.2.3 MTT 细胞活力检测

2.2.4 Western Blot 免疫蛋白印迹方法分析自噬相关蛋白表达情况

2.2.5 MDC染色测定自噬的发生

2.2.6 透射电镜观察自噬小体的形成

2.2.7 mRFP-GFP-LC3 腺病毒转染观察细胞自噬流

2.3 统计学分析

2.4 实验结果

2.4.1 MTT 检测细胞活性

2.4.2 AFB1 暴露后HepG2 细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达的变化

2.4.3 MDC染色测定自噬的发生

2.4.4 透射电镜观察自噬小体形成

2.4.5 Western Blot 检测AFB1 处理后HepG2 细胞自噬流的变化

2.4.6 mRFP-GFP-LC3 腺病毒转染观察细胞自噬流

2.5 讨论

2.6 本章小结

第3 章 AFB1 暴露对HepG2 细胞溶酶体膜通透化的影响

3.1 实验材料

3.1.1 细胞

3.1.2 主要试剂

3.1.3 主要仪器

3.2 实验方法

3.2.1 Lysotracker Red 染色

3.2.2 吖啶橙（AO）染色

3.2.3 细胞免疫荧光染色

3.2.4 溶酶体蛋白的分离与提取

3.2.5 细胞核蛋白与浆蛋白的抽提

3.2.6 Western Blot 免疫蛋白印迹

3.3 统计学分析

3.4 实验结果

3.4.1 免疫荧光分析自噬小体与溶酶体的融合情况

3.4.2 Lysotracker Red 染色观察AFB1 处理后溶酶体pH 变化

3.4.3 吖啶橙（AO）染色观察AFB1 处理后溶酶体pH变化