TLR2/6激动剂CBLB601的辐射防护作用研究

摘要

急性放射病可导致多种组织、器官损伤，严重时甚至会导致死亡。至今临床上仍旧缺乏安全、有效的辐射损伤防治药物。研究发现，在特异性的TLR激活剂诱导下，细胞内促存活因子NF-κB能被广泛活化，进而对包括辐射在内的多种有害胁迫导致的细胞凋亡和组织损伤起到抑制作用。TLR种类繁多，现已在哺乳动物体内发现的就有11种，因而基于TLR信号通路的多种激动剂已被开发出来，其中一些已经或正在进行临床试验。细菌脂蛋白或脂肽通过活化包含TLR2在内的异二聚受体复合物(如TLR1/TLR2，TLR2/TLR6)介导机体的天然免疫应答过程。TLR2信号通路的活化导致NF-κB依赖性抗凋亡因子、抗氧化因子以及细胞因子等表达上调，这些因子的上调增强了机体对辐射因素的抵抗力，促进了辐射造成的造血系统、肠道系统损伤的修复。
　　CBLB601是一种人工合成的支原体脂肽衍生物（synthetic mycoplasma derived lipoproteins，sLP），其特异性受体为TLR2/TLR6或TLR2/CD14，分子式为R,R-Pam2Cys-SKKKK。CBLB601发挥辐射防护作用在于其对造血系统的保护。研究表明注射CBLB601可诱导G-CSF、KC、IL-6等细胞因子水平显著升高，其中IL-6、G-CSF水平的上调可能与其发挥辐射防护作用关系密切。
　　本课题应用60Coγ射线照射C57BL/6小鼠为辐射损失模型，研究了CBLB601预防给药对8.0 Gy60Coγ射线照射小鼠存活的影响以及对6.5 Gy60Coγ射线照射小鼠外周血象恢复的影响。结果表明照射处理24小时前，当给药剂量达到0.15mg/kg时，照后小鼠的30d存活率由0提高到90％，疗效与WR2721相当。与PBS对照组相比，CBLB601预防给药能显著提升6.5 Gy60Coγ射线照射小鼠极性期外周血白细胞、中性粒细胞、红细胞和血小板的最低值，缩短各指标低位持续时间;另外CBLB6010.5 mg/kg给药组白细胞、红细胞和血小板最低值亦显著高于氨磷汀预防给药组。
　　骨髓组织病理表明CBLB601对小鼠骨髓造血细胞也具有潜在的保护效应，表现为CBLB601预防给药组小鼠照射后骨髓造血细胞增殖活跃，骨髓腔中出现出血和水肿的程度较PBS照射组显著减轻。
　　体外研究表明CBLB601能以一种TLR2依赖性的方式激活NF-κB报告基因，促进内源性NF-κB的核异位;同时活化Erk MAPK、IL-6-STAT3等信号通路;CBLB601预防给药能明显提高照射后骨髓细胞的集落形成能力、抑制辐射诱导的骨髓细胞凋亡;此外CBLB601能诱导G-CSF、IL-6等细胞因子水平上升，小鼠预注射IL-6 MAb后其辐射防护效果减弱，这说明IL-6可能对CBLB601药效的发挥起到重要作用。
　　本研究表明CBLB601的辐射防护效果确切，具备开发成为新型辐射防护药物的潜力。

目录

声明

摘要

英文缩略语

主要仪器设备与常用试剂的配制

一、主要仪器设备

二、常用试剂的配制

三、常用培养基、细胞培养液的配制

前言

第一部分 CBLB601辐射防护活性研究

一、材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

第二部分 CBLB601辐射防护机制的初步研究

一、材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．实验结果

全文结论

讨论

参考文献

附录

致谢

个人简历

综述 Toll样受体5靶向激动剂应用研究进展