体外抑制哮喘患者炎性细胞因子生成作用的研究

摘要

实验目的 辅助性T细胞(T helper cell,Th)亚群(Th1/Th2)的功能失衡是哮喘发病的重要机制之一,Th2功能相对增强而导致IL-4、IL-5、IL-13产生量增多,引发一系列哮喘免疫级联反应:气道平滑肌收缩、嗜酸性粒细胞浸润、Ig合成增加及气道高反应等.Th2型细胞因子在哮喘的发病过程中发挥重要作用,哮喘炎性细胞因子主要是Th2型细胞因子或由其诱导而产生,因此抑制Th2型细胞因子的生成是有效阻断哮喘患者气道及肺组织炎症的重要方面.茶碱的安全有效浓度为10-20mg/L,5-10mg/L属于低浓度范围<'[1]>.我们观察低剂量茶碱对哮喘患者辅助性T淋巴细胞(CD+4T)的分化和炎性细胞因子分泌的影响.抗CD86单抗通过阻断抗原递呈细胞和CD<'+><,4>T之间的共刺激信号传导途径,使哮喘患者CD<'+><,4>T不能被有效活化,从而降低了炎性细胞因子的分泌.我们通过两个相互独立的实验从体外观察茶碱及抗CD86单抗对哮喘炎性细胞因子生成作用的影响,探讨它们不同的抗炎机制.实验材料及方法1.材料:尘螨变应原;茶碱;CD4-FIFC单抗和PE-抗人IL-4及IFN-γ抗体;抗CD86单抗;CD4<'+>T免疫磁珠分离系统;胎牛血清;RPMI Medium 1640;细胞培养箱;IL-4、IL-5、IFN-γ双抗体夹心ELISA试剂盒;酶标仪;流式细胞仪.2.方法:实验1:取哮喘患者外周血分离出单核细胞和CD4<'+>T细胞,单核细胞被尘螨变应原刺激活化后与CD4<'+>T分别在茶碱5mg/L和10mg/L两个浓度下共培养,于72小时后收集培养上清,ELISA法检测相应细胞因子生成量,培养细胞用荧光标记单克隆抗体染色,流式细胞仪检测Th细胞内特异性细胞因子.实验2:分别从10例尘螨过敏性哮喘患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中分离出肺泡巨噬细胞(AM)和CD4<'+>T细胞,AM经螨变应原的刺激活化后与CD4<'+>T共培养.实验组分别加抗CD86单抗至:0.1mg/L和1ing/L两个剂量,对照组不加相应抗体.共培养72小时后分别留取培养上清液,ELISA法检测细胞因子INF-γ、IL-4、IL-5的产生量.流式细胞仪(FCM)检测AM表面CD86分子的表达水平.

目录

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缩略语表

前言和文献回顾

正文

实验1低剂量茶碱对哮喘患者CD+4T细胞的影响

1.1引言

1.2实验材料和方法

1.3结果

1.4 讨论

1.6结论

实验2尘螨过敏性哮喘患者肺泡巨噬细胞表面CD86的表达及抗CD86单抗对其细胞因子生成的作用

2.1引言

2.2实验材料和方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.6结论

小结

参考文献

附录

个人简历和发表论文

致谢