6号紫杉醇产生菌中GGPP合成酶cDNA片段克隆的研究和分析

摘要

紫杉醇是从药用植物红豆杉中分离出的具有抗癌作用的天然产物，是有效的天然抗癌药物之一。由于红豆杉生长缓慢且紫杉醇含量极低，导致紫杉醇的供应完全不能满足市场的需求。内生真菌发酵法生产Taxol为解决其药源匮乏问题提供了崭新的思路，而对内生真菌紫杉醇生物合成途径的研究是选育高产紫杉醇工程菌株的主要任务。
　　 本试验提取紫杉醇产生菌6号总RNA，根据已发表的GGPP合成酶cDNA序列设计引物，通过RT-PCR技术扩增其cDNA片段，将扩增得到的基因克隆到pMD20-T载体上，构建重组质粒，转化E.coli DH5α，经蓝白斑和PCR鉴定筛选出阳性克隆并进行序列测定，应用BLAST和DNAStar软件对所测序列进行分析。
　　 试验结果表明用PCR方法成功克隆得到了GGPP合成酶的cDNA片段，大小为357bp，与Genebank已发表序列同源性为98％。

目录

摘要

1．前言

1．1 紫杉醇研究发展阶段

1．2 紫杉醇的研究和开发

1．3 紫杉醇生产方法

1．4 紫杉醇生物合成的相关酶

1．5 香叶基香叶基焦磷酸合成酶

2 材料与方法

2．1 菌株和载体

2．2 试剂盒及购买的试剂

2．3 自配溶液试剂

2．4 仪器和设备

2．5 试验方法

3 结果

3．1 总RNA的提取

3．2 目的基因的扩增结果

3．3 重组子PCR的验证

3．4 目的基因的测序及同源性的比较

4 讨论

4．1 菌种的活化

4．2 总RNA的提取

4．3 PCR引物的设计

4．4 PCR扩增反应

5 结论

参考文献

声明