SOX9基因真核表达载体转染诱导间充质干细胞分化为类髓核细胞的研究

摘要

目的：探讨重组质粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag体外转染诱导兔间充质干细胞向椎间盘细胞分化的影响。
　　方法：构建真核表达载体pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取一月龄新西兰大白兔骨髓分离培养间充质干细胞，体外诱导间充质干细胞向成骨细胞分化并鉴定；流式细胞仪检测细胞表面标志物；将第3代MSCs随机分为转染组和对照组，将重组质粒转染间充质干细胞，经G418筛选2w后，采用RT-PCR检测SOX9和Ⅱ型胶原的mRNA的表达，Western-blot检测SOX9蛋白的表达，免疫组化染色观察Ⅱ型胶原的表达。
　　结果：成功构建了SOX9基因的真核表达载体。间充质干细胞成骨诱导7d后碱性磷酸酶染色可见细胞呈阳性；CD44表达阳性，CD45和CD34表达阴性。将重组质粒转染兔间充质干细胞，72h后观察到转染效率为34.32％±1.75％；转染2周后的间充质干细胞形态改变，呈多角形或椭圆形，细胞体积增大，增殖速度减缓，与椎间盘髓核细胞特性类似。RT-PCR鉴定发现转染组细胞SOX9基因和Ⅱ型胶原的mRNA表达阳性，对照组为阴性。Western-blot检测发现转染组SOX9蛋白表达阳性，对照组未见表达。转染组间充质干细胞的Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。
　　结论：SOX9真核表达载体成功转染兔间充质干细胞，被转染的间充质干细胞向类髓核细胞分化，为进一步研究应用细胞移植治疗椎间盘退行性变奠定基础。

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缩略语表

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前言

文献回顾

一、椎间盘退行性变的研究现状

二、间充质干细胞治疗 IDD 的研究现状

正文

实验一 兔 MSCs 的体外分离培养及鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 真核表达载体转染 MSCs 的实验研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢