甘草中黄酮类有效成分的提取、含量测定和抗氧化性研究

摘要

甘草中的主要有效成分为皂苷类和黄酮类,异甘草素和甘草素作为黄酮类中两种重要的化合物,具有抗炎、抗HIV、抗肿瘤等多种药理作用,因此具有广阔的开发及应用前景。本课题通过对甘草中黄酮类化合物的有效富集,参照2010版药典测定甘草中甘草酸含量的方法,建立同时测定异甘草素和甘草素含量的方法,并对两者的抗氧化活性做了进一步的研究。
　　1.通过超声辅助提取甘草中总黄酮并对其提取工艺条件进行优化。实验以甘草中总黄酮得率为检测指标,采用均匀设计法确定甘草中总黄酮的最佳提取工艺条件为:甲醇体积分数70％、超声时间30 min、固液比1:20(g/ mL),甘草中总黄酮的最大得率为3.28％。
　　2.采用高效液相色谱法等度洗脱和检测波长时间序列采样的方法,同时测定甘草中异甘草素和甘草素的含量。具体色谱条件为:色谱柱Hyporsil ODS2(4.6 mm×250 mm,5μm);检测波长时间序列0~25 min是276 nm,25~70 min是360 mn;流动相CH3OH:H2O=45:55(v/v);流速0.8 mL/min;进样量10μL。异甘草素(R2=0.9996)和甘草素(R2=0.9991)具有良好的线性关系,其平均加样回收率分别为97.9％和98.3％,RSD分别为1.3％和1.64％。
　　3.采用响应曲面法中Box-Behnken研究甲醇体积分数、固液比、超声时间对异甘草素得率的影响,并建立该工艺的二次多项式数学模型。最佳提取条件为:甲醇体积分数70％,超声时间35 min,固液比1:18(g/mL),异甘草素的最佳得率为0.3％。结果显示该回归模型(R2=0.9446,P<0.0001)线性关系良好,且具有高度显著性,可对异甘草素的得率进行有效分析和合理预测。
　　4.利用紫外-可见分光光度法,以维生素C和BHT为阳性对照,研究了异甘草素和甘草素对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH的清除作用。结果显示,四种化合物对三种自由基均具有一定的清除作用,而且维生素C的清除作用最强,异甘草素次之,甘草素较差,BHT最差。

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1 文献综述

1.1甘草属植物资源概况

1.2甘草属黄酮类化合物研究进展

1.3黄酮类化合物的提取方法

1.4黄酮类化合物的含量测定方法

1.5黄酮类化合物的抗氧化性

1.6本课题的目的、意义以及主要内容

2 均匀设计法优化甘草中总黄酮的提取工艺

2.1试剂与仪器

2.2主要溶液的配制

2.3芦丁标准曲线的绘制

2.4总黄酮的含量测定

2.5总黄酮的工艺优化

2.6结果与分析

2.7小结

3 HPLC-UV波长转换法测定甘草中异甘草素和甘草素的含量

3.1仪器与试剂

3.2主要溶液的配制

3.3色谱条件及检测条件

3.4方法学建立

3.5样品含量测定

3.6结果与分析

3.7小结

4 响应曲面法优化甘草中异甘草素的提取工艺

4.1仪器与试剂

4.2主要溶液的配制

4.3异甘草素得率的计算

4.4异甘草素的工艺优化

4.5结果与分析

4.6小结

5 异甘草素和甘草素的抗氧化活性研究

5.1仪器与试剂

5.2主要溶液的配制

5.3抗氧化性实验

5.4结果与分析

5.5小结

结论

参考文献

攻读硕士期间发表的论文及所取得的研究成果

致谢