Ag85A和Ag85B DNA疫苗对大鼠膀胱肿瘤免疫治疗效果的实验研究

摘要

研究背景：膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，初发膀胱癌往往恶性程度较低，在肿瘤的复发过程中有30％的患者肿瘤细胞会出现升级，并有16％-25％患者复发的肿瘤转变为浸润型，侵犯膀胱壁肌层。手术治疗后辅以放疗化疗是目前最主要治疗手段。目前观点认为，卡介苗(Bacille Calmette-Guerin BCG)对于浅表性膀胱癌的免疫治疗和预防术后肿瘤复发是最有效的药物之一，是目前美国FDA唯一批准的膀胱内灌注药物，但是腔内BCG灌注治疗膀胱癌引起的局部或全身并发症，使得BCG腔内灌注用于防治浅表膀胱肿瘤的应用受到一定的限制。近年，DNA疫苗作为一种新的治疗方法，有广阔的应用前景。Ag85复合体(antigen85 complex，Ag85)是BCG培养滤液中主要的分泌蛋白，是由Ag85A、Ag85B、Ag85C组成。有研究表明，Ag85A和Ag85B是主要的功能性蛋白，在诱导机体免疫的过程中起重要作用，而Ag85C无效。上述两种蛋白制成DNA疫苗后能否用于膀胱癌的治疗，并且能否产生和BCG同样的治疗效果而避免BCG腔内灌注产生的诸多副作用是本实验的主要目的。 目的：探讨应用Ag85A DNA疫苗和Ag85B DNA疫苗对大鼠膀胱肿瘤的免疫治疗效果，观察对膀胱肿瘤的抑制效应。 方法：致癌剂N-甲基亚硝基脲(methyl nitrosourea，MNU)膀胱灌注雌性Wistar大鼠制备膀胱肿瘤模型。将建模成功48只大鼠随机分为生理盐水组(NS)、空白质粒组(pcDNA3.1)、卡介苗组(BCG)、Ag85ADNA疫苗组、Ag85B DNA疫苗组和Ag85A+Ag85BDNA疫苗联合组，各8只。建模后第7、14、21天于大鼠右后肢肌肉注射给药。第28天处死大鼠，流式细胞仪检测各组大鼠脾脏的CD4+和CD8+ T细胞亚群数量及所占百分比并计算CD4+/CD8+比值； ELISA法检测大鼠血清中IFN-γ分泌水平；剥离膀胱肿瘤进行组织病理学检查。 结果： 1．成功建立大鼠膀胱癌模型，致瘤率100％。 2．经双酶切鉴定，成功提取重组质粒pcDNA-Ag85A及pcDNA-Ag85B。 3．经疫苗治疗后，Ag85ADNA疫苗组、Ag85B DNA疫苗组和Ag85A+Ag85BDNA疫苗组膀胱肿瘤体积均有所减小、病理分级也有所减轻，但效果不及卡介苗组。 4．Ag85A DNA疫苗组、Ag85B DNA疫苗组和Ag85A+Ag85B DNA疫苗组CD4+、CD8+T细胞亚群数量、CD4+/CD8+比值以及血清IFN-γ含量分别为17.27±2.95、9.03±1.06、1.90±0.10、96.94±12.38pg/ml：23.15±1.56、10.28±0.39、2.25±0.08、131.03±26.68 pg/ml：30.80±1.83、11.29±0.74、2.73±0.19、179.204±28.88pg/ml，与生理盐水、空白质粒组相比，Ag85A DNA疫苗组、Ag85B DNA疫苗组和Ag85A+Ag85B DNA疫苗组能够显著提高以上4项检测指标，但均低于卡介苗组(38.05±1.48、13.14±1.24、2.97±0.23、240.53±32.17 pg/ml)，差别有统计学意义(P＜0.05)；Ag85A+Ag85B DNA疫苗组效果强于Ag85B DNA疫苗组更强于Ag85A DNA疫苗组，差别有统计学意义(P＜0.05)。 结论：应用Ag85A和Ag85B DNA疫苗可提高膀胱肿瘤大鼠的免疫功能，且Ag85BDNA疫苗效果强于Ag85A DNA疫苗，Ag85A和Ag85B DNA疫苗联合应用强于疫苗单独应用，但总体上都达不到BCG的抗膀胱肿瘤免疫效果。

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结论

参考文献

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综述：Ag85基因疫苗用于治疗膀胱肿瘤的研究进展

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