活体红色荧光成像评估Ag85A/B DNA疫苗联合抑瘤效应的实验研究

摘要

研究背景：卡介苗(bacillus calmette-Guerin，BCG)膀胱灌注是预防和治疗膀胱癌最成功的免疫治疗方法，是美国FDA唯一批准的膀胱内灌注药物[1]，但是，BCG作为一种减毒活菌苗在治疗膀胱癌时存在着无菌性膀胱炎、发热、血尿、疗效不确切、易导致结核播散等并发症[2]。因此，有必要研究开发BCG的有效成分并应用新的方法来治疗膀胱癌。
　　 Ag85复合物(antigen85 complex，Ag85)是结核分枝杆菌(M.tubereulosis)分泌蛋白和BCG培养滤液的主要成分，是细菌生长和维持毒力的最重要成分，能够诱导机体强烈的Th1免疫反应和CTL的激活[3-6]。近年来，利用Ag85A和Ag85B的免疫原性治疗膀胱肿瘤越来越受到关注。
　　 而当前评价药物抗肿瘤的疗效多采用术后长期随访、或通过间接测血液的免疫指标、或将动物处死进行肿瘤大小的测量，尚缺少一种可视、直观、动态的评估体系。本实验利用红色荧光蛋白(red fluorescent protein，RFP)具有信噪比高，灵敏度高，分辨率高，观察方便，尤其能适时动态观察同一动物肿瘤生长变化情况[7-8]，构建可视化膀胱癌移植瘤模型。通过活体红色荧光成像，从整体上直接、可视地观测Ag85A/B联合对可视化膀胱癌移植瘤的抑瘤效果，同时从细胞水平检测血清抗体含量水平和脾组织淋巴细胞的增殖活性，明确Ag85A/B DNA疫苗联合治疗膀胱肿瘤的有效性。
　　 目的：探讨可视、直观评估Ag85A/B DNA疫苗联合抑瘤效应的科学方法。
　　 方法：采用红色荧光蛋白基因DsRed-Express标记小鼠膀胱癌细胞BTT739，经G418抗性筛选获得稳定表达RFP的细胞克隆BTT739-RFP，将BTT739-RFP细胞接种到615小鼠皮下，建立可视化膀胱癌移植瘤模型。将建模成功的32只小鼠随机分为pVAX1-Ag85A/B联合组：BCG组；空白质粒(pVAX1)；生理盐水(NS)。分别于给药前即第7、14、21、28天进行活体荧光成像，摄取图片，Maesstro图像分析和处理软件取得定量参数，进行统计学处理。并于第28天检测血清特异性抗体水平和脾淋巴细胞的增殖活性。
　　 结果：
　　 1.构建了稳定表达RFP的BTT739细胞；
　　 2.成功建立可视化膀胱癌模型，成瘤率100％；
　　 3.经治疗后，pVAX1-Ag85A/B组的荧光强度明显低于pVAX1组和NS组，与BCG组无统计学差异;与NS组相比，3w和4w时pVAX1-Ag85A/B组的红色荧光强度均明显低于NS组。
　　 4.pVAX1-Ag85A/B组的抗体滴度为1∶1000，BCG免疫组的抗体滴度为1∶800。
　　 5.pVAX1-Ag85A/B组和BCG组均可提高淋巴细胞增殖活性，二者无统计学差异。
　　 结论：应用Ag85A/B DNA疫苗可提高膀胱癌小鼠的免疫功能，其效果与BCG无统计学差异；活体红色荧光体外成像的评估体系与细胞水平的分析一致。

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实验结果

讨论

结论

参考文献

附图

综述：Ag85 DNA疫苗治疗膀胱肿瘤的研究进展

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