T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

摘要

大量研究证实T细胞疫苗(T cell vaccination，TCV)可以抑制同种异体间移植免疫排斥反应，延长移植物在受者体内的存活时间，关于TCV在诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受方面的研究较少。通过移植异种胰岛细胞治疗Ⅰ型糖尿病(IDDM)虽然供源丰富，但是异种间排斥反应强烈，如何诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的问题亟待解决。TCV是一种潜在的诱导移植免疫耐受的方法，本研究在移植前用TCV免疫受者，移植异种胰岛细胞后观察受者血糖和体重的变化。
　　 目的：探讨特异性TCV诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。
　　 方法：通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(160mg/kg)诱导建立Balb/c小鼠Ⅰ型糖尿病模型。取Wistar大鼠胰腺，用酶消化法和(Ficoll400)不连续密度梯度离心法分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞，整个过程保持无菌操作。供体Wistar大鼠脾淋巴细胞(丝裂霉素处理)和受体Balb/c小鼠脾淋巴细胞按1∶1比例混合培养(细胞浓度为2×105/ml)，加入刀豆蛋白A(ConA)诱导增殖48小时后收集细胞，调细胞浓度制成供者抗原特异性T细胞疫苗备用。实验随机分为三组，A：糖尿病小鼠组；B：PBS对照组：糖尿病小鼠+胰岛细胞移植+PBS平衡盐溶液(对照组)；C：T细胞疫苗免疫组：糖尿病小鼠+胰岛细胞+T细胞疫苗(实验组)。于胰岛细胞移植d-14，d-7，d-1，经腹腔注射疫苗细胞(1×107/ml、0.2ml，i.p)于实验组Balb/c小鼠，对照组用PBS替代。d0将Wistar大鼠的胰岛细胞按1500IEQ/只经肝门静脉导入Balb/c小鼠体内，移植后观测小鼠血糖和体重的变化。Balb/c小鼠的脾细胞作为反应细胞，丝裂霉素处理的Wistar大鼠脾细胞作为刺激细胞，按1∶1的比例(细胞浓度为1×106/m1)混合培养，疫苗接种前和每次接种后第五天分别进行单向混合淋巴细胞反应(MLR)。
　　 结果：模型Balb/c小鼠随机血糖值连续2次＞16.7mmol/l，并稳定五日视为造模成功。DTZ染色胰岛细胞，产量为(3570±356)IEQ/胰腺，纯度达到70％-80％，AO-PI荧光染色胰岛细胞，活率达到80-90％。在观察期间，移植胰岛细胞前小鼠血糖值：糖尿病小鼠组(21.5±1.46)mmol/1，PBS组(20.6±1.57)mmol/l，TCV组(22.3±1.37)mmol/l。胰岛细胞移植后：未移植组小鼠呈持续高血糖状态，移植组小鼠血糖值24h后开始下降，移植d3时PBS组血糖值(11.2±0.86)mmol/l，移植d4达到最低值(9.2±1.36)mmol/l，2天平台期后开始升高，移植d8血糖值(19.4±1.53)mmol/l；移植d3时TCV疫苗组血糖值(11.8±1.84)mmol/l，移植d6达到最低值(6.4±1.67)mmol/l，14天平台期后开始升高，移植d24血糖值(19.5±1.22)mmol/l。胰岛细胞移植前：三组体重变化相似。胰岛细胞移植后：糖尿病组小鼠体重持续下降，TCV组和PBS组小鼠体重在血糖值正常后逐渐升高，PBS组在移植d10开始下降，TCV组体重持续增加至移植d26。MLR结果显示：免疫前TCV组同PBS组平均OD值比较(P＞0.05)无明显差异，免疫后相同时间点TCV组平均OD值明显低于PBS组(P＜0.01)，TCV组免疫后平均OD值显著低于免疫前(P＜0.01)，PBS组免疫前后平均OD值无明显变化(P＞0.05)，无统计学意义。
　　 结论：供体特异性T细胞疫苗免疫受体可以显著延长异种胰岛移植物的存活时间，是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。

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综述　T细胞疫苗与移植免疫耐受

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