Chk1基因表达对精子密度和活力影响的相关研究

摘要

目的：
　　通过检测不同密度和活力的精子的DFI（DNA fragmentation rate，DNA碎片率）、精子细胞存活率及Chk1基因的相关表达，研究精子细胞的密度及活力与Chk1基因表达的关系，并进一步探讨Chk1基因与男性不育之间的相关性。
　　方法：
　　将收集的人类男性精液标本行精液常规检查，根据密度和活力分别分为正常对照组、少精组、弱精组和少弱精组，每组标本各20份。采用吖啶橙法（AOT）检测4组精子中DNA的碎片率，采用伊红—Y染色法检测4组精子存活率，采用RT-PCR方法检测各组精子中Chk1 mRNA的表达,并计算其相对表达量，采用western-blot方法检测各组精子中Chk1蛋白的表达,并计算其相对表达量。
　　结果：
　　1）吖啶橙法检测DNA碎片率发现,与正常组相比,少精子组、弱精子组、少弱精子组 DNA碎片率无明显差异(P＞0.05)；伊红—Y染色法检测精子存活率发现,与正常组相比,少精子组、弱精子组、少弱精子组的精子存活率明显降低,各组间比较均有显著性差异(P<0.05)；
　　2）将各组依照DFI％值分为DFI＞30%和DFI≤30%两组后，两组精子活力、精子密度和精子存活率之间的差异均有统计学意义(P<0.05)；
　　3）RT-PCR检测表明Chk1基因在正常对照组和其他3组的精子中均有表达,四组Chk1基因的相对表达量的组间差异具有显著性(P<0.01)。其相对表达量同精子密度和活力进行Pearson相关分析结果表明，Chk1基因的相对表达量与精子的密度和活力存在相关性(P<0.05)。
　　4）Western-Blot检测表明Chk1蛋白在正常对照组和其他3组的精子中均有表达,四组Chk1蛋白的相对表达量的组间差异具有显著性(P<0.01)。
　　结论：
　　1)DFI与精子密度、活力无显著相关性，但DFI异常可能为影响精子密度和活力的重要因素；
　　2)精子存活率与精子的密度、活力密切相关；
　　3)Chk1在人类精子中有显著表达,且在正常男性与少精、弱精及少弱精患者中的表达显著不同，其表达的改变可能影响精子细胞的密度和活力。

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前言

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.2 实验试剂和仪器

1.3 实验主要测定指标与方法

1.4 统计分析

2 结 果

2.1 正常组、少精组、弱精组、少弱精组DFI及精子存活率结果比较

2.2 精子DFI与精子浓度、前向运动精子(PR)、精子存活率（%）的相关性分析

2.3 精子细胞Chk1 mRNA在各组之间的表达

2.4 精子细胞Chk1基因蛋白在各组之间的表达

讨论

4 结 论

参考文献

综述: 细胞周期点激酶的研究进展

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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