MTX周期联合CTX经JAK-STAT3通路对CIA小鼠Th17细胞分化的影响

摘要

目的：
　　明确MTX周期联合CTX是否通过JAK-STAT3通路抑制CIA小鼠脾脏Na?ve T细胞向Th17细胞分化。
　　方法：
　　本实验以DBA1小鼠为研究对象，包括体内实验和体外实验两部分。
　　体内试验：选取雄性DBA1小鼠56只，随机分为正常对照组10只和CIA组46只。建立CIA模型后根据拟用药不同随机分为4组：CIA组、MTX组（1.5 mg/kg/3d）、CTX组（30 mg/kg/10d）和MTX+CTX组（联合组， MTX：1.5 mg/kg/3d， CTX：30mg/kg/10d）。加强免疫3周后开始给药，治疗过程中连续监测各组小鼠左踝关节肿胀度及关节炎指数d（arthritis index, AI）。给药11周后处死小鼠，取双膝、左踝关节包埋、切片，进行HE染色，观察病理改变。分选脾细胞中的Na?ve T细胞，经细胞因子IL-6、TGF-β1、IL-1β、IL-23刺激于37℃5％CO2细胞培养箱中培养96小时，用流式细胞术检测培养后Th17细胞所占比例，用RT-PCR检测分化后Th17细胞中STAT3的表达水平。
　　体外实验：选取雄性的DBA1小鼠20只建立CIA模型，7周时处死，分选脾淋巴细胞中的Na?ve T细胞，分为空白对照组、抗CD3CD28激活组（激活组）、刺激Th17细胞定向分化组（Th17分化组）、CTX组、低浓度MTX组（MTX低组）、中浓度MTX组（MTX中组）、高浓度MTX组（MTX高组）、MTX低+CTX组（低联合组），在37℃5%CO2细胞培养箱中培养96小时，用流式细胞术检测培养后Th17细胞所占比例，用RT-PCR检测分化后Th17细胞中STAT3的表达水平。
　　结果：
　　1.体内实验
　　(1)治疗前，各治疗组小鼠关节肿胀度、AI与CIA组相比，差异无统计学意义；治疗4周后，各治疗组小鼠关节肿胀度、AI较CIA组改善明显，差异有统计学意义，各治疗组间差异无统计学意义；治疗11周后，联合组小鼠关节肿胀度、AI较CIA组、CTX组改善明显，差异有统计学意义，联合组较MTX组改善明显，但差异无统计学意义；
　　(2)治疗11周后，各治疗组Th17细胞所占百分较CIA组明显降低，差异有统计学意义，联合组Th17百分率较单用药组降低明显，但差异无统计学意义；
　　(3)治疗11周后，各治疗组Th17细胞中STAT3 mRNA的表达均低于CIA组，差异有统计学意义，联合组Th17细胞中STAT3 mRNA的表达低于单用药组，但差异无统计学意义。
　　2.体外实验
　　(1)体外培养96h后，Th17分化组Th17细胞所占百分比与空白组、MTX中组、MTX高组、低联合组相比，差异有统计学意义；低联合组与单用药组相比，培养后Th17细胞所占百分比降低，差异无统计学意义；
　　(2)体外培养96h后，Th17分化组Th17细胞中STAT3 mRNA的表达与空白组、MTX中组、MTX高组、低联合组相比，差异有统计学意义；低联合组与单用药组相比，培养后Th17中STAT3 mRNA的表达降低，差异无统计学意义。
　　结论：
　　MTX周期联合CTX可能通过JAK-STAT3通路影响CIA小鼠Th17细胞的分化。

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常用缩写词中英文对照表

前言

第一部分 体内实验

1 材料与方法

2 结 果

3 结 论

第二部分 体外实验

1 材料与方法

2 结 果

3 结 论

结论

讨论

参考文献

综述: JAK-STAT信号通路的最新研究进展

致谢

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