MTX联合CTX经RORγt介导对CIA小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

摘要

目的：
　　MTX联合CTX能否阻断RORγt信号通道，进而调节Th17/Treg细胞平衡，抑制炎症反应。
　　方法:
　　选取雄性 DBA1小鼠56只，随机分为正常对照组10只和 CIA组46只。建立CIA模型后根据拟用药不同随机分为4组：CIA组、MTX组（1.5 mg/kg/3d）、CTX组（30 mg/kg/10d）和MTX+CTX组（联合组，MTX：1.5mg/kg/3d， CTX：30mg/kg/10d）加强免疫3周后开始给药，治疗过程中连续监测各组小鼠左踝关节肿胀度及关节炎指数（arthritis index, AI）。给药11周后处死小鼠，取双膝、左踝关节切片，进行 HE染色，观察病理改变。分选脾细胞中的 Na?ve T细胞，加入刺激剂于37℃5％CO2细胞培养箱中培养96小时，用FCM方法检测各组Th17和Treg细胞及其比值；用RT-PCR方法检测各组RORγt和Foxp3mRNA及其比值。
　　结果:
　　（1）经治疗11周后各治疗组关节肿胀、AI、关节病理表现较 CIA组明显改善，有显著性差异；联合组关节肿胀度与CIA组相比差异有统计学意义（P＜0.05），与CTX、MTX单用药组相比，差异尚无统计学意义。联合组关节AI评分与CIA组相比差异有统计学意义（P＜0.05），与CTX、MTX单用药组相比，差异尚无统计学意义。
　　（2）经给药11周后流式细胞术检测培养后小鼠脾脏 Naive T细胞中 Th17细胞所占比例，CIA组较正常对照组 Th17细胞所占比例明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组较 CIA组 Th17细胞所占比例降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；联合组较与CTX、MTX单用药组降低Th17细胞，差异尚无统计学意义（P＜0.05）。
　　（3）经给药11周后流式细胞术检测培养后小鼠脾脏 Naive T细胞中Treg细胞所占比例，CIA组较正常对照组 Treg细胞所占比例明显减低，差异有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组与CIA组相比Treg细胞降低，差异尚无统计学意义。
　　（4） Th17/Treg可以发现CIA组较正常对照组Th17/Treg明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组较 CIA组Th17/Treg显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；联合组与CTX、MTX单用药组相比Th17/Treg降低，差异尚无统计学意义（P＜0.05）。
　　（5）经治疗11周后 RT-PCR检测小鼠分化后 Th17细胞中RORγt mRNA的表达水平，CIA组较正常对照组RORγt mRNA所占比例明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组较 CIA组RORγt mRNA所占比例降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；联合组较与CTX、MTX单用药组降低RORγt mRNA，差异尚无统计学意义（P＜0.05）；经治疗11周后 RT-PCR检测小鼠分化后 Treg细胞中Foxp3mRNA的表达水平，CIA组较正常对照组Foxp3mRNA所占比例明显减低，差异有统计学意义（P＜0.05）；各治疗组与CIA组相比Foxp3mRNA降低，差异尚无统计学意义；通过对RORγt/Foxp3mRNA可以发现CIA组较正常对照组RORγt/Foxp3mRNA明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；联合组较 CIA组RORγt/Foxp3mRNA显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；CTX、MTX单用药组与CIA组相比RORγt/Foxp3mRNA降低，差异尚无统计学意义（P＜0.05）。
　　结论:
　　证实MTX联合CTX较单用药能更有效地抑制RORγt信号转倒通道，从而控制免疫炎性细胞Th17增加，调节Th17/Treg细胞平衡。

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常用缩写词中英文对照表

前言

第一部分 CIA模型

1 材料和方法

1.1 实验的动物

1.2 实验器材

1.3 实验试剂

1.4 实验液体配制

1.5 实验的方法

1.6 CIA动物模型的观察指标及评价方法

2 结 果

2.1 CIA疾病对照组的造模成功率

2.2 分组

2.3 各组小鼠存活率

3 讨 论

4 结 论

第二部分 MTX联合CTX经RORγt介导对CIA小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 CIA小鼠关节肿胀程度测量结果

2.2 CIA小鼠关节AI结果

2.3 HE染色结果

2.4 Th17和Treg细胞分化流式检测及其比值

2.5 Th17和Treg细胞分化过程中的 RORγt和Foxp3基因水平表达及其比值

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述:RA中RORγt介导Th17细胞分化的信号通路及相关治疗新进展

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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