内质网应激在Pm2.5诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡中的作用

摘要

目的：
　　本研究通过用pm2.5干预传代培养的大鼠肺泡巨噬细胞，检测细胞存活率、凋亡率，及内质网应激信号分子CHOP、GRP78的mRNA相对表达量，探讨内质网应激在pm2.5诱导肺泡巨噬细胞凋亡过程中的作用。
　　方法：
　　用不同浓度的pm2.5干预传代培养的肺泡巨噬细胞（NR8383细胞），分6个浓度组（分别为H0：0μg/ml，空白对照组，加等体积的PBS液；H1：40μg/ml；H2：80μg/ml；H3：160μg/ml；H4：320μg/ml；H5：640μg/ml），经12h、24h、48h三个时间后，用MTT法检测NR8383细胞的存活率，选择最佳的干预时间。将传代的NR8383细胞接种于6孔板，浓度组设置同MTT，每组设3个复孔（n=3），经最佳干预时间后，采用流式细胞术检测各浓度组细胞的早期凋亡率及总凋亡率,用RT-PCR法检测各浓度组CHOPmRNA、GRP78mRNA的相对表达量。
　　结果：
　　pm2.5干预12h后，H1组与H0组、H2组与H1组细胞存活率间的差异无统计学意义（P＞0.05）,余组间差异有统计学意义（P＜0.05），且随干预浓度的增加，细胞存活率下降。干预24h后，除H5组与H4组差异无统计学意义（P＞0.05），余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。干预48h后，H4组与H3组及H5组与H4组差异无统计学意义（P＞0.05），余各组细胞存活率的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。各浓度组在pm2.5环境中暴露分别暴露12h、24h、48h后，以暴露24h后各浓度组间差异较12h、48h明显，确定24h为最佳的干预时间。经不同浓度的pm2.5干预24h后，H1组较H0组、H5组较H4组的细胞早期凋亡率无明显增加，差异无统计学意义（P＞0.05），余各组与H0组相比，细胞早期凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。干预24h后，各浓度组的细胞总凋亡率较H0组均增加明显，且随干预的浓度的增加，细胞凋亡率相应增加，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度pm2.5干预24h后，H1组较H0组、H4组较H3组的GRP78mRNA的相对表达量无明显增加，差异无统计学意义（P＞0.05），余各组与H0相比，GRP78mRNA的相对表达量均增加,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。干预24h后，各浓度组的细胞CHOPmRNA的相对表达量较H0组增加明显，随干预浓度的增加，其相对表达量相应增加，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　pm2.5诱导NR8383细胞凋亡，内质网应激参与pm2.5诱导NR8383细胞凋亡的过程。