叶酸、hnRNP E2与HPV16晚期蛋白在宫颈上皮内瘤变中的作用及交互效应

摘要

目的：高危型人乳头瘤病毒（high risk human papillomavirus, HR-HPV）16的持续感染是宫颈癌发生的主要病因因素，HPV16 DNA整合到宿主细胞染色体是宫颈癌变发生的关键。晚期基因L1、L2不仅可作为HPV感染的指标，更重要的是可作为病毒与宿主染色体发生整合的重要标志。核不均一核糖核蛋白E2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein E2,hnRNP E2）参与基因转录和转录后调控过程，晚期基因含有多个与RNA结合蛋白结合的位点和结构，hnRNP E2的KH结构域提供了与HPV16晚期基因特异结合的独特分子结构。叶酸缺乏导致DNA的合成与甲基化过程发生障碍。有研究发现，宫颈癌细胞中叶酸缺乏会导致核不均一核糖核蛋白E1（hnRNP E1）与HPV16 RNA结合，使病毒衣壳蛋白的表达减少，促进HPV16 DNA整合到宿主基因。hnRNP E2和hnRNP E1属于同一类RNA结合蛋白，有关叶酸、hnRNP E2与HPV16晚期蛋白是否在CIN中有相互作用尚未见相关报道。本研究旨在分析不同CIN组叶酸水平、hnRNP E2及HPV16晚期蛋白的表达情况，探讨叶酸、hnRNP E2与HPV16晚期蛋白在CIN的作用及交互效应，以期为CIN的病因学研究和干预靶点提供依据。
　　方法：于2014年6月至2014年9月在山西省介休市建立的社区宫颈病变研究队列中，随机选取正常宫颈（NC）妇女61例、低度宫颈上皮内瘤样变（CINⅠ）患者59例、高度宫颈上皮内瘤样变（CINⅡ/Ⅲ）患者60例为研究对象。所有研究对象经宫颈液基薄层细胞学检测技术（TCT）筛查、阴道镜检查，最终经病理学确诊，均在签署知情同意书的情况下进入研究。采用结构式问卷收集研究对象的一般人口学特征、生活习惯、生殖情况、既往病史等资料。采用化学发光法测定血清叶酸水平，导流杂交法检测HPV感染状况，Western-blot检测hnRNP E2、HPV16 L1、L2蛋白表达水平。应用SPSS19.0软件进行相关资料的检验、Logistic回归和Kruskal-Wallis H检验。应用相加模型及交互作用指标超额危险度（RERI）、归因危险比（API）以及交互作用指数（S）进行两因素间交互作用的评估，应用广义多因子降维法（GMDR）分析多因素间的交互作用。
　　结果：⑴HPV与宫颈上皮内瘤变的关系：HPVs感染率在NC组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组分别为21.3％、42.4%、60.0%，HPV16感染率在NC组、CINⅠ组、CINⅡ/Ⅲ组分别为11.5%、15.3%、41.7%。HPVs感染导致CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ的发生是HPV阴性的2.576、4.732倍，而HPV16感染导致CINⅡ/Ⅲ的发生是HPV阴性的4.086倍，随着宫颈上皮内瘤变程度的加重，HPVs及HPV16感染率均呈升高趋势（2趋势=18.607， P<0.001；2趋势=15.525，P<0.001）。⑵HPV16 L1、L2与宫颈上皮内瘤变的关系：HPV16 L1、L2蛋白相对表达量在各组间不全相同（H=8.689，P=0.013；H=6.878，P=0.032）。两两比较显示，CINⅡ/Ⅲ组的HPV16 L1、L2蛋白相对表达量低于CINⅠ组，而HPV16 L1、L2蛋白相对表达量在NC组与CINⅠ组、NC组与CINⅡ/Ⅲ组的差异均无统计学意义。⑶hnRNP E2与宫颈上皮内瘤变的关系：hnRNP E2蛋白相对表达量在各组间不全相同（H=14.030，P=0.001），两两比较显示，CINⅡ/Ⅲ组的hnRNP E2蛋白相对表达量低于NC组，CINⅠ组与NC、CINⅡ/Ⅲ组间的差异均无统计学意义。hnRNP E2低表达导致CINⅡ/Ⅲ的发生是hnRNP E2高表达的4.531倍，随着宫颈上皮内瘤变程度的加重，hnRNP E2表达逐渐降低（趋势=8.590，P=0.003）。⑷叶酸与宫颈上皮内瘤变的关系：叶酸含量在各组间不全相同（H=18.307，P＜0.001），经两两比较发现，CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组血清叶酸含量均低于NC组，CINⅠ组与CINⅡ/Ⅲ组间的差异无统计学意义。叶酸缺乏导致CINⅠ和CINⅡ/Ⅲ的发生是叶酸充足的3.684、7.320倍，且随着宫颈上皮内瘤变程度的加重，叶酸含量逐渐降低（2趋势=16.770，P<0.001）。⑸叶酸、hnRNP E2、HPV16 L1、L2在宫颈上皮内瘤变中的相关关系：分别对叶酸、hnRNP E2、HPV16 L1、L2各因子之间的相关性分析结果显示，叶酸与HPV16 L1（r=0.149，P=0.046）、hnRNP E2与HPV16 L2（r=0.382，P=0.014）、L1与L2（r=0.407， P=0.008）之间存在正相关关系。⑹不同宫颈上皮内瘤变组叶酸、hnRNP E2与HPV16间的交互作用分析：应用相加模型对叶酸、hnRNP E2与HPV16之间的交互作用进行分析，结果显示，清叶酸缺乏与HPV16感染、hnRNP E2低表达与HPV16感染均在CINⅡ/Ⅲ组中存在正相加效应。采用广义多因子降维法（GMDR）进一步分析了叶酸、hnRNP E2、HPV16 L1、L2在宫颈上皮内瘤变中的交互作用，结果表明，CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组叶酸缺乏、hnRNP E2低表达、HPV16 L1低表达、HPV16 L2低表达的交互效应均为最佳交互作用模型。
　　结论：①HPVs和HPV16感染均可增加CIN的发病风险，因此在育龄妇女中开展HPV筛查，积极预防并控制HPV感染，有助于预防宫颈癌的发生。②叶酸缺乏出现在CIN的早期，且叶酸缺乏与HPV16感染对CINⅡ/Ⅲ的发生具有协同效应，提示早期进行宫颈病变患者叶酸水平的检测，可为预测和评估病变进展提供重要参考。③hnRNP E2、HPV16 L1、L2蛋白低表达可增加患CINⅡ/Ⅲ组的风险，提示其低表达更易进展为CINⅡ/Ⅲ，为高度宫颈上皮内瘤变提供诊断标志，且hnRNP E2低表达与HPV16感染对CINⅡ/Ⅲ的发生具有协同效应。④叶酸缺乏、hnRNP E2、HPV16 L1、L2低表达四者的交互作用可能促进CINⅠ和CINⅡ/Ⅲ的发生，提示宫颈上皮内瘤变可能受膳食、基因和病毒间的交互作用的调控。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

材料与方法

1.研究对象

2.资料收集

3.实验检测

4.资料整理与分析

结果

1. 研究对象的一般人口学特征

2. 宫颈上皮内瘤变的相关因素分析

3. HPV感染与宫颈上皮内瘤变的关系

4. hnRNP E2与宫颈上皮内瘤变的关系

5. 叶酸与宫颈上皮内瘤变的关系

6. 不同宫颈上皮内瘤变组叶酸、hnRNP E2与HPV16间的交互作用分析

7. 叶酸、hnRNP E2、HPV16 L1、L2在宫颈上皮内瘤变中的相关关系

8. 广义多因子降维法分析不同宫颈上皮内瘤变中因素间的交互作用

讨论

1. 影响宫颈上皮内瘤变的相关因素

2. HPV与宫颈上皮内瘤变的关系

3. hnRNP E2与宫颈上皮内瘤变的关系

4. 叶酸与宫颈上皮内瘤变的关系

5. 叶酸、hnRNP E2与HPV16晚期蛋白在宫颈上皮内瘤变中的交互作用

全文小结

参考文献

综述:不均一核糖核蛋白对HPV16晚期基因表达调控的研究进展

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