hnRNP E1与HPV16早期基因E2和E6在宫颈病变中的作用及交互效应

摘要

目的：人乳头瘤病毒（human papilloma virus, HPV），特别是高危型HPV（HR-HPV）16持续感染是宫颈癌及其癌前病变最主要的病因因素，HPV DNA与宿主细胞DNA整合是病毒致癌作用的重要机制。HPV16早期基因E2和E6是与病毒致癌密切相关的基因，E2是HPV整合的关键基因，E6是病毒癌基因。核不均一核糖核蛋白E1（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein，hnRNPE1）在基因转录和转录后调控中具有独特作用，特别值得关注的是，hnRNP E1特有的KH域提供了与HPV16基因发生特异性结合的独特分子结构，但hnRNPE1在宫颈病变中的作用及与HPV16 E2和E6的关系尚不清楚。本次研究以不同宫颈病变患者为研究对象，明确其HPV感染状态，检测不同级别宫颈组织中hnRNP E1蛋白表达水平，以及与HPV16整合相关基因 E2蛋白表达水平和致癌基因E6蛋白表达水平。以期揭示 hnRNP E1与HPV16早期基因E2和E6在宫颈癌变进展中的作用及相互关系，为进行HPV致宫颈癌作用机制的研究提供新思路。
　　方法：于2014年6月至9月在山西省介休市建立的自然人群宫颈病变队列中，分别选取正常宫颈妇女（NC）56例，低度宫颈上皮内瘤变（CINⅠ）患者58例和高度宫颈上皮内瘤变（CINⅡ/Ⅲ）患者50例，以及2015年11月至2016年5月在山西省肿瘤医院就诊的宫颈鳞状细胞癌(SCC)病人40例作为研究对象，所有的研究对象都是经液基薄层细胞检测技术（TCT）筛查、阴道镜检查、最终由病理学确诊的。在获得知情同意的情况下，采用结构式问卷收集全部研究对象的人口学特征、生活习惯、个人卫生习惯和生殖情况等资料，同时采集全部研究对象宫颈组织活检标本和宫颈脱落细胞。采用导流杂交法检测HPV感染状况，Western blot检测hnRNP E1以及HPV16早期基因E2和E6蛋白表达水平。应用SPSS16.0软件进行相关资料的Kruskal-Wallis H检验、Bonferroni检验、χ2检验、χ2趋势检验、Spearman秩相关分析、logistic回归和因子分析，应用相加模型、相乘模型及广义多因子降维（GMDR）模型进行交互作用评价。
　　结果：⑴HPVs/HPV16感染与宫颈病变的关系: HPVs感染率（41.38％、58.00%、87.5%）和 HPV16感染率(15.52%、40.00%、67.50%)在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和 SCC组均高于NC组的感染率（16.07%、8.93%），并随着宫颈病变严重程度加重均呈现升高趋势。HPVs感染（CINⅠ: aOR=3.62(1.41-9.29); CINⅡ/Ⅲ: aOR=6.44(2.48-16.72); SCC: aOR=28.32(5.24-98.46)）和 HPV16感染(CINⅠ: aOR=1.73(0.51-5.86);CINⅡ/Ⅲ:aOR=5.96(1.92-18.49);SCC:aOR=13.96(3.33-58.50)）与宫颈病变之间均呈正关联。⑵hnRNP E1与宫颈病变的关系:hnRNP E1表达量在不同宫颈病变组间差异有统计学意义（H=9.979, P=0.019），随着宫颈病变严重程度加重呈现降低趋势（χ2趋势=9.50，P=0.002），hnRNP E1表达量与CINⅡ/Ⅲ和SCC之间均呈负关联。hnRNP E1低表达与 HPV16感染在宫颈病变中存在正相加交互作用，而相乘交互作用未显示有统计学意义。⑶HPV16早期基因 E2和 E6与宫颈病变的关系: HPV16 E2表达水平（H=16.20，P=0.001）与HPV16 E6表达水平（H=15.44，P=0.001）在不同宫颈病变组间差异均有统计学意义。HPV16 E2蛋白表达量在SCC组和CINⅡ/Ⅲ组均低于NC组，SCC组低于CINⅠ组，差异均有统计学意义，其它组间差异均无统计学意义。HPV16 E6蛋白表达量仅在SCC组与CINⅠ组差异有统计学意义，其余任意两组之间差异均无统计学意义。E2/E6比值与宫颈病变程度呈现负相关。⑷hnRNP E1与 HPV16早期基因E2和E6在宫颈病变中的交互作用:应用广义多因子降维模型（GMDR）分析显示，hnRNP E1低表达/HPV16 E2低表达/HPV16 E6高表达在CINⅡ/Ⅲ和SCC组存在交互作用，而在CINⅠ组未发现类似交互作用存在（P＞0.05）。
　　结论：①HPVs/HPV16感染是宫颈病变发生的危险因素，预防和控制HPVs/HPV16感染可降低宫颈病变发生的风险。②hnRNP E1低表达可增加CINⅡ/Ⅲ和SCC的发生风险，提示hnRNP E1表达可以反映宫颈病变进展情况，hnRNP E1低表达可能是宫颈病变加重的有效指标，可以作为高度宫颈病变和癌变的诊断和预测依据，且hnRNP E1低表达与HPV16感染在宫颈病变的发生中可能存在协同作用。③HPV16整合关键基因E2蛋白低表达与主要致癌基因E6蛋白高表达是SCC发生的危险因素，是宫颈癌变的有效指标，可以作为SCC的诊断依据。E2/E6比值与宫颈病变程度呈负相关，可以反映宫颈病变的进展情况。④hnRNP E1低表达/HPV16 E2低表达/HPV16 E6高表达在宫颈病变中存在交互作用，三者共同存在时的作用大于单独存在时作用的和，提示宫颈病变的发生可能存在病毒与基因之间的协同作用。hnRNP E1可以作为防治宫颈病变的干预靶点，预防和控制HPV16感染，降低两者形成交互效应的机会，可使宫颈病变发生的风险降低。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 对象与方法

1.1研究对象

1.2资料收集

1.3实验检测

1. 4实验方法

1.5资料的整理与分析

1.6质量控制

2 结 果

2.1研究对象的人口学特征

2.2宫颈病变相关因素分析

2.3 HPVs/HPV16感染与宫颈病变的关系

2.4 hnRNP E1与宫颈病变的关系

2.5 HPV16早期基因E2和E6与宫颈病变的关系

2.6 hnRNPE1与HPV16早期基因E2和E6在宫颈病变中的交互作用

3 讨 论

3.1 HPVs及HPV16感染与宫颈病变的关系

3.2 hnRNP E1与宫颈病变的关系

3.3 HPV16早期基因E2和E6与宫颈病变的关系

3.4 hnRNP E1与HPV16 E2和E6基因在宫颈病变中的关系及相互作用

4 结 论

创新与不足

1.本研究的创新点

2.本研究的不足

参考文献

综述:核不均一核糖核蛋白E/K与宫颈癌关系的研究进展

致谢

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