HGF对NASH 小鼠肝组织内质网应激的影响及意义

摘要

目的：建立NASH小鼠模型，通过观察NASH小鼠模型证实NASH疾病发展过程中存在内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ER stress)；通过注射重组人肝细胞生长因子（recombinant human hepatocyte growth factor，rhHGF）,探讨HGF对NASH肝组织ER stress的影响，为HGF在NASH患者中可能的临床应用提供理论依据。
　　方法：选用6W雄性SPF级BALB/c小鼠18只，经纯化标准饲料AIN93M（10％kcal Fat）适应性喂养1周，第2周开始造模，定义为正常对照组（6只）和高脂组（12只）。对照组仍旧使用AIN93M（10%kcal Fat）进行喂养，高脂组纯化饮食选用TP23400（60%kcal Fat）喂养16周，在第17周末将高脂组分为NASH模型组（6只）和HGF组（6只），对HGF组小鼠进行尾静脉注射rhHGF，正常对照组和NASH模型组分别经小鼠尾静脉注射生理盐水，注射剂量均为0.5μg/（kg·d），连续注射14天，在隔夜禁食12小时后，测量小鼠体重；内眦静脉取血，离心取血清，测定丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase，AST）、甘油三酯（triglyceride，TG）的水平；ELISA法及放射免疫法测炎性因子白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平；处死小鼠，观察肝脏形态并测量肝湿重，计算肝指数；取部分中叶肝组织进行苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining，HE)染色，显微镜下观察其病理变化并选用NAFLD活动度积分(NAFLD activity score，NAS）评分；使用凯基全蛋白提取试剂盒进行肝脏组织全蛋白的提取，ELISA法测ER stress相关蛋白即葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein78，GRP78）和C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）的水平。
　　结果：⑴成功制造NASH小鼠模型；⑵NASH模型组体重及肝指数与正常对照组相比升高明显（P<0.05）；⑶NASH模型组小鼠的ALT、AST、IL-6、IL-1β及TNF-α水平均明显高于正常对照组（P<0.05），HGF组比NASH模型组明显降低（P<0.05）；⑷NASH模型组的TG水平较正常对照组明显升高（P<0.05），HGF组高于NASH模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；⑸组织学变化：正常对照组小鼠肝组织的HE染色切片可见清晰的肝脏小叶结构，肝细胞与肝血窦并行呈放射样整齐排列，未见脂滴和炎细胞，NASH模型组的小叶结构紊乱，肝细胞排列无序，可见大量脂滴和炎细胞浸润；HGF组较NASH模型组的病理改变减轻；⑹ELISA法测得NASH模型组GRP78水平高于正常对照组（P<0.05），NASH模型组CHOP水平高于正常对照组，但差异无统计学意义；HGF组两种蛋白水平较NASH模型组均有所降低（P<0.05）。
　　结论：通过建立NASH小鼠模型，观察到在NASH疾病的发生发展过程中，ER stress参与肝脏的损伤机制；HGF可通过抑制NASH疾病中的ER stress反应，起到保护肝脏的作用。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂、设备

1.3实验步骤

1.4统计方法

2 结 果

2.1小鼠的一般情况

2.2小鼠的体重、肝湿重及肝指数的变化

2.3小鼠肝脏形态及组织病理学的改变

2.4小鼠血清ALT、AST、及TG的变化

2.5小鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α的变化

2.6小鼠肝组织GRP78、CHOP水平的变化

3 讨 论

3.1 构建NASH小鼠模型

3.2内质网应激与NASH

3.3 HGF对NASH的影响

3.4 HGF对NASH肝组织ER stress的影响以及可能的机制

4结 论

参考文献

附图

综述:非酒精性脂肪性肝病发生发展机制的研究进展

致谢

个人简历