利用分子马达技术对副溶血性弧菌进行快速分型检测方法的研究

摘要

食源性致病菌是引起食源性疾病的重要因素之一，对人类健康造成极大的危害，是食品安全的重大隐患。在临床诊断、流行病学调查、食品中微生物检测及医院感染监控等方面，致病菌的分子分型及检测是必不可少的内容。以受控分子马达技术为核心，集成免疫识别、荧光探针标记与检测、阵列微接触印刷和LED光源编码控制等技术，在食源性病原菌分子马达检测技术的基础上，建立一种快速、高通量的对同种或同属食源性致病菌进行快速分型检测的新方法。
　　本论文首先提取嗜热菌载色体，荧光探针 F-DHPE标记载色体，制备F0F1-ATPase上的ε亚基抗体，并用生物素标记N’端，以副溶血性弧菌毒力基因tdh、trh和种特异性基因tlh、toxR为靶基因设计4个探针，并用生物素标记5’端，然后将ε亚基抗体与F0F1-ATPase结合，通过“生物素-亲和素”系统将探针与F0F1-ATPase连接构建F0F1-ATPase分子马达生物传感器。
　　提取副溶血性弧菌的DNA，应用构建的F0F1-ATPase分子马达生物传感器对其进行分型检测，一方面，对种特异性基因 tlh、toxR的检测可以对副溶血性弧菌进行检测鉴定；另一方面，对毒力基因tdh、trh的检测可以对副溶血性弧菌是否具有毒性进行分型判断；对分子马达分型检测方法进行特异性、灵敏度等进行了验证，对载色体添加时间、荧光素酶添加时间、反应温度等对分型检测的影响进行了研究，对分型检测方法进行了优化，最终建立了用于副溶血性弧菌致病性快速分子分型的F0F1-ATPase分子马达分型鉴定方法。通过对实际样品进行检测，证明该方法具有简便、快速、省时、省力、特异性高、灵敏度高等优点，为副溶血性弧菌的快速分型检测提供了一种有效工具。

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0 前言

0.1 食源性病原菌分子分型方法介绍

0.2生物传感技术在食源性致病菌检测中的应用

0.3分子马达生物传感检测技术研究进展

0.4 本研究的目的及意义

1 分子马达检测装置的研制

1.1 Chromatophore制备及水解活性测定

1.2 分子马达生物传感器的构建

1.3 实验结果

2副溶血性弧菌分子马达分子分型检测方法的构建

2.1副溶血性弧菌简介

2.2 食源性致病菌分子马达分子分型检测方法的构建

2.3 分型结果

3 副溶血性弧菌分子马达生物传感器检测效果评价

3.1 探针特异性评价

3.2 副溶血性弧菌分子马达生物传感器稳定性的评价

3.3 结果与讨论

4 检测方法的优化及实际样品的检测

4.1 分子马达生物传感器分型检测方法的优化

4.2 样品的检测分型

4.3 结果与讨论

5 结论

参考文献

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