红树林耐酸真菌Penicillium camemberti OUCMDZ-1492抗H1N1活性产物研究

摘要

耐酸微生物是一类极其重要的特境微生物，具有与普通微生物相比不同的遗传背景和代谢途径，能够产生多种独特的生物活性物质，存在着多方面的潜在利用价值。红树林是一种陆海交界的典型生态系统，其土壤呈酸性，存在丰富的微生物资源，其中的耐酸真菌由于所处的生活环境特殊，其遗传及生理特性与其它环境中的微生物有很大不同,能产生独特的次生代谢产物，具有很大成药潜力。对于红树林酸性（pH5）土壤中微生物次生代谢产物的研究鲜有报道，该项研究工作前景诱人。
　　为了研究耐酸菌株中结构新颖，具有抗病毒活性的次生代谢产物，我们采用化学和活性相结合的集成筛选法，开展了对红树林酸性土壤次生代谢产物的研究工作。内容包括：耐酸菌株的分离与纯化；耐酸菌株的筛选及“天才”菌株的获得；目标菌株的发酵条件摸索；菌株发酵及化合物分离；单体化合物结构鉴定及生合成途径的推测；化合物活性初步评价及构效关系的推测。
　　本文对中国海南省文昌红树林共31个根泥样品进行了微生物的分离纯化得到205株耐酸菌株，通过运用TLC、HPLC指纹图谱化学筛选模型以及抗甲型流感病毒H1N1生物活性筛选模型，最终筛选得到1株耐酸天才真菌（Talented Strains），对其次生代谢产物进行了深入研究。
　　在考察了不同发酵条件对这株菌的次生代谢产物的影响，包括培养方式，酸度，培养基等，确定了最佳的发酵条件。因在同一酸度（pH5）、两种培养基中菌株代谢情况有较大差异，该论文在这两种条件下对菌株Penicillium camemberti OUCMDZ-1492进行了两次不同规模的发酵培养，后用乙酸乙酯对发酵液进行萃取，获得发酵提取物。综合采用硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相等多种色谱方法对耐酸天才真菌Penicillium camemberti OUCMDZ-1492的次生代谢产物进行化学分离获得17个单体化合物（化合物结构及名称参见Fig.1）。利用NMR(核磁共振谱)、MS（质谱）、UV(紫外光谱)、IR(红外光谱)、CD(圆二色谱)等现代波谱学方法以及 X-射线单晶衍射、化学反应等方法确定了该17个化合物的结构，其中8个新化合物。吲哚二萜类化合物11个（1-11）、5个α-吡喃酮类（12-16）和1个酰胺类化合物。
　　运用体外及体内生物活性筛选模型，采用MTT法、SRB法等方法评价所获得的单体化合物的抗肿瘤活性和抗流感病毒H1N1活性；采用琼脂稀释法评价化合物对致病菌的抑菌活性。结果表明：化合物1-3和5-10对H1N1病毒有显著的抑制活性，IC50分别为28.3，38.9，32.2，73.3，34.1，26.2，6.6，77.9和17.7μM，其活性超过阳性对照利巴韦林。
　　综上，本文对一株耐酸真菌的次生代谢产物进行了系统研究，共分离鉴定了17个化合物，包括6个新的吲哚二萜类化合物，1个新的α-吡喃酮类化合物和1个新的酰胺类化合物,其中化合物1-3、5-10表现出显著的抗H1N1流感活性。这些研究发现低pH条件下更利于菌株OUCMDZ-1492产生丰富的次生代谢产物,增加其化学多样性,进一步证实了菌株次生代谢产物可由体外pH调节，低 pH可以激活某些沉默基因，促进抗H1N1病毒活性物质产生。

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前 言

参考文献

第一章 耐酸真菌的分离及筛选

第一节 耐酸真菌的分离与纯化

第二节 耐酸真菌的筛选及耐酸“天才”真菌的获得

第三节 目标菌株的发酵条件摸索

第四节 小结与讨论

参考文献

第二章 Penicillium camemberti OUCMDZ-1492次生代谢产物研究

第一节 菌株发酵及化合物分离

第二节 单体化合物结构鉴定

参考文献

第三章 实验部分

第一节 实验仪器、材料及试剂

第二节 实验方法

参考文献

结语与创新点

个人简历及本论文相关研究成果

个人简历：

相关研究成果：

致谢

附录