鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用

摘要

目的:研究N-(1-烃氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L丙氨酸-4’-去甲-4-脱氧鬼臼酯(Lg-2)对人肝癌细胞系HepG-2的诱导凋亡作用及机制。
　　方法:1、采用MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响;2、流式细胞仪检测Lg-2对HepG-2细胞周期和凋亡;3、Hoechs33258染色检测Lg-2对HepG-2细胞凋亡形态学的影响。4、荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测Lg-2处理后对HepG-2细胞凋亡相关基因p53、bax、bc1-2、p21、caspase3表达的影响。
　　结果:Lg-2对Hepg-2细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用,随药物浓度增加,抑制效应增强,与VP-16处理组差异有统计学意义(p<0.05)。随时间延长,抑制作用逐渐增强,12-60h Lg-2处理组与VP-16处理组差异有统计学意义(p<0.05)。细胞周期测定显示Lg-2作用24和48h后,随时间延长S期细胞所占比例与对照组及VP-16组比较均明显增加,而G2/M期细胞显著减少。Hoechst33258染色显示Lg-2处理组细胞核固缩,碎裂,呈凋亡样改变。药物处理后bc1-2mRNA的表达呈降低趋势,而p53、bax、p21、caspase3mRNA的表达呈增高趋势,且Lg-2处理组作用优于VP-16处理组。
　　结论:结果表明Lg-2可能通过使细胞周期阻滞在G2期抑制细胞增殖,使细胞阻滞在S/G2期。并通过p53、p21、caspase3信号途径诱导其凋亡达到抑制肿瘤生长的目的,该过程可能与其上调p53、bax、p21、caspase3表达和下调bc1-2基因的表达有关。本研究为开发新的肝癌辅助用药提供了理论依据,将有利于指导相关临床前研究的开展。

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缩略语表

引言

一．材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

1.1.2 主要试剂的配制

1.2 方法

1.2.1 HepG-2细胞的培养

1.2.2 MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响

1.2.3 流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡

1.2.4 Hoech33258染色检测细胞凋亡的形态学变化

1.2.5 实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测细胞凋亡相关基因的表达情况

1.2.6 统计学处理

二．结果

2.1 MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响

2.2 Lg-2对HepG-2细胞周期的影响

2.3 Lg-2对HepG-2细胞凋亡的形态学变化

三．讨论

四．结论

参考文献

附录

致谢

文献综述

攻读学位期间取得的研究成果

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