缺血再灌注损伤对大鼠肾脏足细胞podocin表达的影响及意义

摘要

研究背景:通过动物实验观察缺血再灌注(IschemiaReperfusion,I/R)引起大鼠肾脏足细胞表podocin的表达变化特点,进一步探讨缺血再灌注肾损伤时对足细胞表面蛋白的影响和损伤的机制。
　　材料与方法:将60只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组和模型组。对照组(S组):用20％的乌拉坦(0.1ml/100g)给予大鼠腹腔内注射麻醉后,在其腹部正中线位置处切口,切口线长约3-5cm,分离出双侧肾动脉后,立即关闭腹腔。模型组(M组):同样的方法麻醉后,正中线打开腹腔,进腹找到肾蒂并钝性游离肾动脉,分离出双侧肾动脉后用动脉夹夹闭,此时,红润的肾脏立刻变为黄白色逐渐变为暗红色,缺血30min后恢复灌流,4min后看到肾脏颜色逐渐变为红润色,表明再灌注成功,逐层缝合大鼠腹正中切口(大鼠体温在术中恒温至37℃)。术后给大鼠适当补水、保温(37℃恒温箱)。造模成功后根据实验设计于选择不同时间段采集标本。用Western Blot法检测肾皮质Podocin蛋白表的达量,采用CL-7200/7300全自动生化分析仪分别检测血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量,并与对照组进行比较。
　　研究结果:两组大鼠摄水量和排尿量和摄食均有不同程度减少。M组24h组可见肉眼血尿。6h后血清尿素氮开始升高,48h达到高峰(P<0.05);而血肌酐则于48h升高(P<0.05)。S组各时间点的血清尿素氮、肌酐各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白印迹结果显示,两组大鼠肾脏皮质podocin蛋白在42KD均有明显清晰条带表达。但对照组表达更明显,与其相比,模型组podocin蛋白于3h开始下降,以后各组表达逐渐下降(P<0.05),并且在48h组podocin蛋白下降最为明显(P<0.01),且差异有统计学意义。S组各时间点podocin比较差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论:(1)缺血再灌注肾损伤时大鼠肾功明显发生改变,尿素氮早期开始升高,血肌酐晚期升高明显,大鼠肾脏足细胞podocin的蛋白表达随着缺血再灌注时间的延长而改变,早期下降不明显,3h组开始逐渐下降,48h组下降最明显。以上可以说明缺血再灌注损伤后大鼠肾脏足细胞podocin蛋白随着缺血再灌注的时间延长,其表达逐渐减少。(2)这种变化可以提示在缺血再灌注肾损伤时,足细胞表面相关蛋白podocin表达的减少可能会导致足细胞损伤。

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前言

材料与方法

1. 材料

1.1 实验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器：

2. 方法

2.1 动物分组及模型制备

2.2 标本的采集

2.3 大鼠肾功能的检测

2.4蛋白印迹法检测

3. 统计学处理

结果

1．大鼠的一般状态

2.血生化检测结果

3.Podocin蛋白在肾皮质的表达变化

讨论

1、大鼠在缺血再灌注引起急性肾损伤时动物模型的建立

2、大鼠肾脏足细胞相关蛋白损伤机制

4、 Podocin在缺血再灌注大鼠急性肾损伤中的变化特点及作用

结论

参考文献

附录

致谢

综述

攻读学位期间取得的研究成果

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