开通玄府方对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞相关蛋白nephrin、podocin表达的影响

摘要

研究目的：研究对象为高脂高糖喂养、左肾切除术和腹腔注射STZ联合诱导SD大鼠为糖尿病肾病的模型，观察具有开通玄府作用的开通玄府方对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞相关蛋白 nephrin、podocin表达的影响，探索开通玄府方对糖尿病肾病大鼠24h蛋白尿的影响及对肾脏的保护作用及部分机制。　　方法：雄性成年SD（Sprague-Dawley）大鼠，高脂高糖饲料喂养加上左肾切除手术加小剂量STZ腹腔注射造模，成模后进行分组：模型（n=12），培哚普利组（n=12）、低剂量中药组（n=12）、高剂量中药组（n=12）及空白对照组（n=12）。予模型组和空白对照组给予生理盐水，予开通玄府方、培哚普利分别对高、低剂量组及培哚普利组治疗干预。整个实验期内，检测大鼠体重、血糖及24h尿蛋白定量；8周实验期结束后检测24小时尿蛋白定量及生化指标（血肌酐(Scr)、总胆固醇(Chol)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)）。免疫组化法对大鼠肾小球基底部的足细胞相关蛋白nephrin、podocin染色,结合计算机图像（Image-proplus）分析检测nephrin、podocin的表达强度。　　该研究立足于创新中医传统理论，提出DN属于“玄府病变范畴”假说，将开通玄府法治疗糖尿病肾病的机制与调节足细胞损伤相关标志物织nephrin、pidocin联系起来，有助于微观角度诠释开通玄府法科学内涵，为糖尿病肾病中西医结合研究寻找切入点、开拓新思路。　　采用SPSS21.0软件包进行数据的统计分析,结果用均数±标准差（ x?s）表示。采用单因素方差分析统计组间的计量资料的比较。显微镜及油镜镜下观察肾脏细胞：足细胞的胞膜或者足细胞胞浆出现棕色的颗粒即为阳性。每张切片运用显微镜随机采集个不重复9个肾小球进行拍照，将图像导出并储存。图像分析系统：采用Image－ Pro Plus系统对图片中免疫组化阳性信号进行分析。图像输入系统进行光度转换,记录光密度值。程序自行计算每个肾小球积分光密度、阳性信号面积，求和取平均数。以积分光密度（IOD）代表目的蛋白的相对表达量， IOD＝阳性面积X平均光密度，每组选取9个肾小球，经显微摄像系统输入电脑，选择图像分析系统中的免疫组化模块，利用软件进行测量分析，取其均值代表该蛋白的相对表达量。　　结果：1、24h尿蛋白定量：与正常对照组比较,各组糖尿病肾病大鼠尿蛋白定量升高显著,差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比,开通玄府方及培哚普利的干预,高、低剂量中药组、培哚普利组尿蛋白定量均下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。高、低剂量中药组尿24h蛋白定量均低于培哚普利组,差异有统计学意义（P＜0.05）。　　2、nephrin、podocin分布位置：（×1000）油镜下观察正常对照组大鼠肾组织免疫组化切片,可见podocin和nephrin的染色呈棕褐色，线装分布于基底膜的足细胞。模型组的podocin和nephrin在肾小球分布无规则可循、不均匀、染色减弱明显。高、低剂量中药组与培哚普利组染色在肾小球基底膜足细胞的分布相对均匀,棕褐色沉积明显。　　nephrin、podocin表达：实验结束,与正常对照组相比,统计结果显示糖尿病肾病大鼠组podocin蛋白表达强度均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比,统计结果显示经开通玄府方及培哚普利的干预,高、低剂量中药组、培哚普利组podocin蛋白表达强度升高,差异有统计学意（P＜0.05）；高、低剂量中药组podocin蛋白表达强度均高于培哚普利组,差异有统计学意义（P＜0.05）。实验结束,与正常对照组相比,统计结果显示糖尿病肾病大鼠组nephrin蛋白表达强度均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比,统计结果显示经开通玄府方及培哚普利的干预,高、低剂量中药组、培哚普利组nephrin蛋白表达强度升高,差异有统计学意（P＜0.05）；高、低剂量中药组nephrin蛋白表达强度均高于培哚普利组,差异有统计学意义（P＜0.05）。　　结论:　　开通玄府方能够降低DN大鼠蛋白尿的排泄量，起到保护肾脏的作用，这可能与其上调足细胞相关蛋白 nephrin、podocin的表达相关。

目录

声明

缩略语表

前言

第一部分 开通玄府法对DN大鼠24h蛋白尿排泄量及血清指标的影响

1.材料与方法

2.结果

第二部分 开通玄府方对DN大鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响

1.材料与方法

2.指标收集及检测

讨论

1.开通玄府方与Nephrin、podocin蛋白的表达

2.开通玄府方与蛋白尿

3.ACEI与DN蛋白尿：

结论

参考文献

附录一 综述:中药汤剂及单味药治疗糖尿病肾病研究简述

附录二 在校期间发表论文情况

致谢