外源性硫化氢对大鼠皮肤成纤维细胞胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢体系影响的研究

摘要

目的：研究大鼠正常皮肤体外培养的成纤维细胞在加入外源性硫化氢和胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂后，细胞培养后上清液硫化氢含量及其生成酶胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达水平的变化规律，探讨大鼠皮肤成纤维细胞是否存在硫化氢/硫醚-γ-裂解酶体系。
　　方法：大鼠正常皮肤成纤维细胞为研究对象，按照正常的成纤维细胞培养条件进行培养和传代，取第4代的成纤维细胞，随机分为空白对照组、实验对照组、NaHS组和PPG组。在细胞培养板上每组设立3个副孔，每孔置入相同浓度和数量的成纤维细胞。细胞培养48小时后，进行细胞同步化并加入不同浓度的干预剂，继续培养24h收集细胞上清液及细胞。用敏感硫电极测定细胞上清液H2S含量，用Trizol法提取成纤维细胞总RNA并鉴定后RT-PCR测定CSE mRNA基因表达水平。
　　结果：NaHS组细胞上清液H2S含量较空白对照组、实验对照组增高(P<0.05)， PPG组细胞上清液H2S含量较空白对照组、实验对照组降低(P<0.05)，空白对照组、实验对照组、NaHS组（N1,N2,N3）、PPG组（P1,P2,P3）各组间对比大鼠正常皮肤成纤维细胞 CSE mRNA表达水平均无显著性差异，结果无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：大鼠正常皮肤成纤维细胞存在硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶体系，外源性硫化氢、PPG不能使离体培养的大鼠正常皮肤成纤维细胞CSE mRNA表达水平产生变化。

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目录

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 实验条件

2.2 主要试剂

2.3 主要仪器

2.4 主要溶液配置

2.5 测定指标及方法

2.6 成纤维细胞培养

2.7 实验分组及技术路线图

2.8 敏感硫电极测上清液H2S浓度

2.9 RT-PCR测细胞CSE mRNA表达水平

2.10 统计方法

第3章 结 果

3.1 上清液硫化氢浓度

3.2 RT-PCR测CSE mRNA

第4章 讨 论

第5章 结 论

参考文献

致谢

附录

英文缩略词

实验仪器

实验试剂

实验操作图片

综述: 气体信号分子硫化氢在烧伤领域的研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

作者简介