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第一章综述
1.1淀粉酶概述
1.1.1淀粉
1.1.2淀粉酶的发现和分类
1.1.3 α-淀粉酶概述
1.1.4 α-淀粉酶的性质
1.2 α-淀粉酶应用进展
1.2.1 α-淀粉酶的来源与生产
1.2.2酶法加工淀粉
1.2.3 α-淀粉酶的活性测定方法
1.3α-淀粉酶分子生物学
1.3.1 α-淀粉酶家族
1.3.2α-淀粉酶的分离和基因的克隆
1.3.3α-淀粉酶的一级结构
1.3.4 α-淀粉酶的高级结构
1.4枯草芽孢杆菌表达系统
1.4.1枯草芽孢杆菌表达系统发展简史
1.4.2枯草芽孢杆菌表达系统常用载体和宿主
1.4.3枯草芽孢杆菌外源蛋白的表达
1.4.4芽孢杆菌表达外源蛋白的优势与缺陷
1.5研究目的和意义
1.6研究内容及目标
第二章α-淀粉酶的分离纯化及酶学性质分析
2.1材料与方法
2.1.1实验材料
2.1.2实验仪器
2.1.3试剂
2.1.4溶液
2.1.5培养基及培养条件
2.1.6聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.1.7菌株的分离和筛选
2.1.8α-淀粉酶(AMY-1)粗酶液的提取
2.1.9 α-淀粉酶(AMY-1)的分离和纯化
2.1.10 α-淀粉酶的酶活性测定方法
2.1.11 α-淀粉酶的酶学性质分析
2.1.12 α-淀粉酶降解淀粉的动力学分析
2.1.13市场来源的中温α-淀粉酶(AMY-2)的纯化及酶学性质的测定
2.2结果与分析
2.2.1淀粉降解菌的筛选
2.2.2 α-淀粉酶(AMY-1)的纯化
2.2.3标准曲线的绘制
2.2.4 α-淀粉酶(AMY-1)酶学性质研究
2.2.5 α-淀粉酶(AMY-1)的动力学分析
2.2.6市场来源的中温α-淀粉酶(AMY-2)的酶学性质
2.3讨论
本章小结
第三章α-淀粉酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
3.1材料与方法
3.1.1实验材料
3.1.2实验仪器、工具酶和试剂
3.1.3细菌基因组DNA的提取：
3.1.4从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
3.1.5 连接
3.1.6大肠杆菌感受态细胞的制备
3.1.7大肠杆菌细胞电击转化
3.1.8筛选重组子
3.1.9 16SrDNA的克隆和序列分析
3.1.10 α-淀粉酶基因(amy)全长序列的获得
3.1.11α-淀粉酶基因(amy)的大肠杆菌重组表达质粒的构建
3.1.12 α-淀粉酶基因(amy)在大肠杆菌中的诱导表达及检测
3.2结果与分析
3.2.1产α-淀粉酶菌株B-10的16SrDNA的序列及同源性分析
3.2.2α-淀粉酶基因(amy)全长序列的获得
3.2.3 α-淀粉酶基因原核表达重组质粒的构建
3.2.4 α-淀粉酶基因(amy)在大肠杆菌中的诱导表达
3.3讨论
本章小结
第四章α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达
4.1材料与方法
4.1.1实验材料
4.1.2实验仪器、工具酶和试剂
4.1.3培养基
4.1.4启动子区域的克隆及功能验证
4.1.5 β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)活性测定
4.1.6枯草杆菌感受态细胞的制备及转化
4.1.7 α-淀粉酶基因的枯草芽孢杆菌中表达
4.2结果
4.2.1启动子片断的克隆及功能验证
4.2.2 α-淀粉酶基因(amy)在枯草芽孢杆菌中表达
4.3讨论
本章小结
全文结论
参考文献
致谢
作者简历
硕士期间发表论文情况
