雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞激活作用的体内外研究

摘要

本研究首先提取雪灵芝粗多糖（arenaria kansuensis crude polysaccharide， AKCP），通过体外实验检测AKCP对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用，再通过检测不同剂量 AKCP对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫指标的影响进行验证。从体内外研究水平证实了AKCP具有免疫促进作用。
　　在体外研究中，以不同浓度AKCP作用于体外培养的免疫细胞48 h，采用中性红吞噬实验及NO释放实验检测巨噬细胞功能，MTT法检测脾淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性，流式细胞术检测脾淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群， ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中 IL-2及 IFN-γ的水平。结果显示：在体外，AKCP各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和NO释放量、脾淋巴细胞刺激指数及培养上清中 IFN-γ水平、NK细胞杀伤活性均高于空白对照组（ P＜0.05）；AKCP中浓度组脾淋巴细胞CD3+、CD4+亚群及培养上清中IL-2水平也明显升高（P＜0.05）。
　　在体内研究中，将小鼠随机分为5组：空白对照组、环磷酰胺（CTX）模型组、AKCP高、中、低剂量组。除空白对照组外其他4组采用腹腔注射CTX建立小鼠免疫低下模型。各组分别给予蒸馏水、不同剂量AKCP灌胃，10 d后处死小鼠，检测体重增率、胸腺指数、脾脏指数、脾淋巴细胞增殖活性和CD3+/CD4+/CD8+亚群、NK细胞杀伤活性、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、血清中IL-2和IFN-γ水平。结果显示：在体内，CTX组除NK细胞杀伤活性外的上述各项指标均较对照组明显降低（P＜0.05），不同剂量 AKCP作用可减轻CTX所致的各项指标下降，其中AKCP高、中剂量组体重增率、胸腺指数、脾淋巴细胞CD3+及CD3+CD8+亚群、巨噬细胞吞噬率与吞噬指数均较CTX模型组明显升高（P＜0.05），AKCP低剂量组脾脏指数、脾淋巴细胞增殖指数、以及IL-2和IFN-γ水平显著高于CTX模型组（P＜0.05）。
　　以上研究结果表明，AKCP对小鼠免疫细胞的增殖与功能具有体外激活作用；对CTX所致的免疫抑制小鼠，从淋巴器官重量、淋巴细胞增殖、Th1细胞因子分泌乃至单核巨噬细胞的功能，都具有保护和促进作用。

目录

声明

英文缩略语表

第1章 引言

第2章 雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用

2.1 材料与仪器

2.2 方法

2.2.1 雪灵芝粗多糖（AKCP）制备

2.2.2 中性红吞噬实验法及NO释放实验法检测小鼠腹腔巨噬细胞功能

2.2.3 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备

2.2.4 MTT法检测小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性

2.2.5 MTT法检测NK细胞杀伤活性

2.2.6 流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞亚群

2.2.7 ELISA 双抗体夹心法检测IL-2和IFN-γ水平

2.2.8 统计学方法

2.3 结果

2.3.1 AKCP对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬中性红及释放NO功能的影响

2.3.2 AKCP对小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性的影响

2.3.3 AKCP对小鼠NK细胞体外杀伤活性的影响

2.3.4 AKCP对体外培养小鼠脾淋巴细胞亚群的影响

2.3.5 AKCP对小鼠脾淋巴细胞体外分泌 IL-2 和IFN-γ水平的影响

2.4 小结

第3章 雪灵芝粗多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

3.1 材料与仪器

3.2 方法

3.2.1 雪灵芝粗多糖（AKCP）制备

3.2.2 动物及分组

3.2.3 体重增率、脾脏及胸腺指数测定

3.2.4 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备

3.2.5 小鼠脾淋巴细胞增殖活性检测

3.2.6 NK细胞杀伤活性检测

3.2.7 小鼠脾淋巴细胞亚群检测

3.2.8 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能检测

3.2.9 小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平检测

3.2.10 统计学方法

3.3 结果

3.3.1 AKCP对免疫抑制小鼠体重增率、胸腺及脾脏指数的影响

3.3.2 AKCP对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖活性及NK细胞杀伤活性的影响

3.3.3 AKCP对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞亚群的影响

3.3.4 AKCP对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

3.3.5 AKCP对免疫抑制小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平的影响

3.4 小结

第4章 结论

参考文献

综述:雪灵芝的研究进展

致谢

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