松花粉硫酸酯化多糖影响 T2MD 小鼠血糖调节机制的初步研究

摘要

本实验室以前的研究结果表明,SPPM60可显著性的提高小鼠脾细胞内钙离子浓度,而PPM60作用不明显,SPPM60可通过调控外钙内流和内钙释放来提高细胞的钙离子浓度。钙离子的浓度与葡萄糖刺激的胰岛素的释放密切相关。采用阻断MIN6细胞外钙和内钙通路的方法来观察PPM60和SPPM60的作用,结果显示SPPM60可以改善细胞的胰岛素分泌。本实验通过探讨PPM60及SPPM60改善2型糖尿病小鼠血糖的机制,以研究PPM60及SPPM60是否能改善胰岛素敏感性,为松花粉硫酸酯化多糖可以作为治疗糖尿病的候选药物或者作为相关的保健食品提供理论依据。本实验分为以下几个主要部分。 一,松花粉多糖的提取、酯化:取1000g破壁的马尾松花粉,采用水煮醇沉的方法提取花粉多糖,得到60%的乙醇沉淀花粉多糖22.650g。用苯酚-硫酸法测得PPM60糖含量为64.20%,运用氯磺酸-吡啶法硫酸酯化5gPPM60,经冷冻干燥后得到浅黄色SPPM60,约为7.141g。氯化钡-明胶比浊法测得SPPM60取代度为1.96。紫外光谱显示多糖不含有核酸和蛋白质。 二,选择合适浓度。通过高糖高脂饲料联合35mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ成模。小鼠一次成模率较高(90%左右),成模后小鼠出现肥胖,且高血糖现象较为稳定,与人类T2MD的发病特点相似。实验组小鼠表现为高血糖症和体重增长过快,经治疗后,多糖高、酯化低和多糖中、酯化中、酯化高5组血糖水平显著性下降(P<0.05、P<0.01),酯化多糖各组血糖水平成剂量依赖性下降,多糖高和酯化高两组体重增加量最小,因此选取最适多糖及酯化多糖浓度为200mg/kg/d。 三,通过高糖高脂饲料联合35mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ成模。小鼠一次成模率较高(95%左右),成模后小鼠出现肥胖,且高血糖现象稳定,符合人类2型糖尿病的发病特点,且成模后小鼠死亡率较低。成模后将小鼠分为5组(空白组、模型组、200mg/kg/d多糖组、200mg/kg/d酯化多糖组、200mg/kg/d二甲双胍组),口服治疗4周。第10周末检测体重、血糖水平、胰岛素、口服糖耐量测试、胰岛素敏感指数,组织学分析各组小鼠胰岛形态的变化,骨骼肌GLUT-4mRNA的表达情况。结果显示模型组小鼠血糖水平高,胰岛素敏感和糖耐量水平受到损坏。与空白组小鼠相比,模型组小鼠的胰岛形态受损明显。经PPM60治疗后高血糖症得到改善(P<0.05),但是胰岛素水平和胰岛素敏感性变化差异性不显著。经SPPM60和二甲双胍治疗后高血糖症(P<0.01、P<0.01)、高胰岛素血症(P<0.01、P<0.01)以及胰岛素敏感性(P<0.01、P<0.01)得到改善,胰岛形态受损情况得到一定恢复。SPPM60与PPM60相比,各个指标都出现明显的改善。 以上结果表明: ⑴PPM60对2型糖尿病小鼠空腹血糖、胰岛素水平的调节影响较小,经硫酸酯化后SPPM60产生了不同程度上的抗糖尿病功效,并且成剂量依赖性上升; ⑵最适浓度的SPPM60能显著性的降低糖尿病小鼠的血糖和胰岛素水平,有效地改善胰岛素抵抗和葡萄糖耐受能力,上调糖尿病小鼠的胰岛素敏感性,PPM60和SPPM60相比具有显著性差异; ⑶PPM60和SPPM60部分修复受损的胰岛β细胞,SPPM60的修复效果接近于二甲双胍。

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第一章 综述

1松花粉及多糖

2糖尿病

3天然活性多糖对糖尿病的影响

4小结

第二章 马尾松花粉多糖的提取、酯化及鉴定

1材料与试剂

2仪器与设备

3方法步骤

4实验结果

5 讨论

第三章 T2MD小鼠模型的建立及最适多糖浓度的选取

1材料与试剂

2实验方法及步骤

3实验结果

4讨论

第四章 最适浓度的多糖及其酯化物对T2MD小鼠血糖调节的影响

1材料与试剂

2实验方法及步骤

3实验结果

4讨论

展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章