应用基因芯片检测奶牛乳房炎主要致病菌的研究

摘要

本文采用基因芯片技术，建立了一套相对快速、高效、同时检测和鉴定奶牛乳腺炎主要致病菌的方法。以细菌的16S rDNA基因为检测的主要靶基因，同时也涉及了23S rDNA，设计筛选出了一套用于检测鉴定奶牛乳房炎主要致病菌的属或种的寡核苷酸探针，制备了检测奶牛乳房炎主要致病菌的基因芯片。在引物对样品中的细菌相应的基因片段扩增的同时，进行靶基因的生物素标记，扩增的产物与硝酸纤维素膜上的探针进行杂交，酶联、显色后根据芯片扫描仪的判读结果来确定奶牛乳房炎致病菌感染的种类。实验中，首先检测了通用引物的广谱性、通用引物PCR扩增灵敏度及特异探针的特异性，证明这些引物和探针符合本实验的需要。其次，本文建立了一套基于16S rDNA的检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌6种致病菌的基因芯片检测方法，对杂交条件进行了优化，研制了与之相应的价格低廉、易于推广的小型操作平台。对建立的芯片检测方法的特异性、灵敏度进行了评测，基因芯片检测灵敏度是PCR检测的10倍，金黄色葡萄球菌为0.3cfu/m1，铜绿假单胞菌为0.2cfu/ml，6种致病菌都表现了较强的杂交图谱。

目录

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缩略语对照表

引言

试验一通用引物在奶牛乳房炎主要致病菌检测中的作用研究

1材料与方法

2结果

3讨论

试验二 生物信息学在引物与探针的设计中的应用研究

1材料与方法

2结果

3讨论

试验三 应用基因芯片检测奶牛乳房炎主要致病菌的研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

附图

致谢

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