山羊发情周期中卵巢内FSHR的定位及其mRNA表达规律的研究

摘要

促卵泡素（FSH）是垂体前叶分泌的一种糖蛋白类激素，对动物的性腺发育和生殖调控起到极其重要的作用。它的生理功能是通过分布于颗粒细胞的特异性受体一促卵泡素受体（FSHR）所介导（Sites CK，1994）。FSHR于1972年首先由Means在大鼠睾丸的支持细胞（Means AR，1972）表面证实，随后在卵巢的各级卵泡（Oktay G，1997）、卵母细胞（Meduring，2002）、颗粒细胞（Meduring，2002）以及输卵管（Zeng W，Magid M.S，1996）和子宫（Shemesh M，1997、Mizrachi D，1999）中都有发现。FSHR在卵巢中的作用是促进卵泡内膜分化，颗粒细胞增生，刺激卵泡发育、增大直至成熟（关洪斌，李庆章，2002），且卵巢中的FSHR mRNA的表达量与产仔数之间存在密切的关系（唐杰，2007）。因此，研究FSHR mRNA在济宁青山羊卵巢组织中的表达量，对探讨FSHR的作用机理、如何加快卵泡的生长分化、促进优势卵泡的形成和提高低繁家畜的繁殖率具有重要的意义。本研究采用免疫组织化学方法与实时荧光定量PCR（RT-qPCR）差异显示技术，对处于发情周期不同阶段济宁青山羊卵巢组织内的FSHR进行定位与mRNA水平上的定量分析。结果发现：
　　 1.发情周期的不同阶段内济宁青山羊卵巢中FSHR mRNA的表达呈现一定的规律性，发情期表达量最高，发情后期最低，自发情后期、间情期、发情前期、发情期表达量依次增加。
　　 2.基因表达结果分析显示FSHR基因在发情周期中卵巢内的表达量分别为：发情后期（0.3500±0.1316）<间情期（0.7716±0.2340）<发情前期（1.7286±0.2605）<发情期（2.8748±0.2770）。统计结果表明，发情期FSHR mRNA的表达量与发情后期差异显著，但未达到极显著水平（0.010.05）。
　　 3.免疫组织化学方法显示：济宁青山羊卵巢中FSHR阳性细胞主要见于颗粒细胞、膜细胞、卵母细胞。发情周期中FSHR阳性细胞数量均随着卵泡发育而增多，发情后期的黄体中并没有发现FSHR的存在。
　　 4.发情期不同阶段卵巢内FSHR阳性细胞数量为发情期>发情前期>间情期>发情后期。

目录

文摘

英文文摘

符号说明

1 引言

1.1 下丘脑-垂体-卵巢轴对动物生殖的影响

1.2 FSH的结构与功能

1.3 FSHR的结构与功能

1.4 FSH和FSHR与多胎性的关系

1.5 实时荧光定量PCR技术及其优点

1.6 济宁青山羊

1.7 本研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 实验地点

2.1.3 主要试剂和实验用品

2.2 免疫组织化学方法检测卵巢组织中FSHR阳性细胞分布

2.2.1 切片标本制备

2.2.2 HE法染色

2.2.3 SABC免疫组织化学方法

2.2.4 对照实验

2.2.5 Image pro-plus 4.5图像分析

2.3 实时荧光定量方法检测卵巢组织中FSHR mRNA的表达量

2.3.1 总RNA的提取

2.3.2 RNA质量的鉴定

2.3.3 引物设计及RT-PCR扩增

3 结果及分析

3.1 免疫组织化学结果

3.1.1 发情周期中FSHR免疫阳性细胞在卵巢中的分布规律

3.1.2 发情周期中FSHR免疫阳性细胞在卵巢中的变化规律

3.2 荧光定量PCR实验结果

3.2.1 总RNA及PCR产物的电泳检测结果

3.2.2 标准曲线及其目的基因的扩增效率

3.2.3 熔解曲线分析结果

3.2.4 动力学曲线分析

3.2.5 发情周期中FSHR mRNA在卵巢中的表达规律

4 讨论

4.1 研究FSHR的定位及其mRNA表达量的优越性

4.2 卵巢中FSHR与卵泡早期发育的关系

4.3 FSHR与卵巢功能的关系

4.4 发情周期中FSHR mRNA表达规律与卵巢功能的关系

4.5 卵巢中FSHR免疫阳性细胞在高、低繁山羊中的对比

4.6 卵巢中FSHR mRNA表达量与繁殖率的相关性

5 结论

参考文献

附图

致谢

个人简介及攻读学位期间论文发表情况