沂蒙黑山羊发情周期卵巢内GTH受体定位及其mRNA表达规律的研究

摘要

动物生殖活动受到体内外多种因素的调控，促性腺激素（GTH）作为下丘脑-垂体-性腺轴的关键激素，是卵巢发育和生殖激素分泌中的主要调节信号。卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）和黄体生成素（luteinizing hormone，LH）是垂体前叶分泌的糖蛋白类激素，其调控功能通过卵巢中相应的FSHR（follicle stimulating hormone receptor）和LHR(luteinizing hormone receptor)介导实现，在哺乳动物卵巢卵泡的生长发育、优势化及排卵等方面具有重要的功能。本实验选取健康未孕的成年沂蒙黑山羊，按发情周期（间情期、发情前期、发情期、发情后期）采血，离心取血清,应用放射性免疫分析法（RIA）测定山羊发情周期外周血中FSH和LH的含量；然后宰杀取卵巢，应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术和免疫组织化学技术对山羊卵巢组织内FSHR、LHR基因进行了mRNA水平上的定量和定位分析。结果表明:
　　 1.RIA法结果显示：沂蒙黑山羊外周血中LH分泌量始终高于FSH。FSH在发情前期最高，与其他时期相比差异显著(P<0.05)。FSH在发情期最低，与发情前期相比差异显著(P<0.05)，与发情后期和间情期相比差异不显著(P>0.05)；外周血中LH的分泌比较平稳，在发情后期与间情期稍高，发情前期与发情期稍低，各时期之间差异不显著(P>0.05)。
　　 2.qRT-PCR技术结果显示：沂蒙黑山羊发情周期不同阶段卵巢组织中都FSHR mRNA的表达，FSHR mRNA的表达量分别为：0.6187±0.29442(间情期)，1.2902±0.29024(发情前期),2.5759±0.45880(发情期)，0.7908±0.26193(发情后期)，其中发情期最高,与其他三个时期相比差异极显著（P<0.01）。间情期最低，与发情前期和发情期相比差异极显著（P<0.01），与发情后期相比差异不显著（P>0.05）。
　　 3.qRT-PCR技术结果显示：沂蒙黑山羊发情周期不同阶段卵巢组织中都LHR mRNA的表达，LHR mRNA的表达量分别为：2.2840±0.14622(间情期)，0.5089±0.07899(发情前期)，0.3403±0.04538(发情期),2.8592±0.20566(发情后期)，其中发情后期最高，与其他三个时期相比差异极显著（P<0.01）。在发情期的表达量最低，与发情后期、间情期相比差异极显著（P<0.01），与发情前期相比差异不显著（P>0.05）。
　　 4.免疫组织化学方法结果显示：沂蒙黑山羊发情周期各个阶段的卵巢组织中都有FSHR免疫反应阳性细胞分布，阳性细胞主要见于卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞，另外卵巢基质细胞和血管周围间质中也有分布，但在黄体细胞没有FSHR阳性细胞。
　　 5.免疫组织化学方法结果显示：沂蒙黑山羊发情周期各个阶段的卵巢组织中都有LHR阳性细胞分布，阳性细胞主要见于卵泡颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞、血管周围间质、黄体细胞以及卵巢基质细胞。

目录

文摘

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论文说明:英文缩写词

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1引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

5. 结论

参考文献

附图

致谢

个人简介及攻读学位期间论文发表情况